ГОСТ 25311-82 Мука кормовая животного происхождения. Методы бактериологического анализа (с Изменением N 1)
4. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
4.1. Определение общего количества микробов в 1 г муки
4.1.1. Метод основан на способности живых бактериальных клеток образовывать макроколонии при оптимальных условиях культивирования на питательных средах.
4.1.2. По 1 см каждого разведения вносят в стерильные бактериологические чашки и заливают 10-15 см
стерильного, расплавленного и охлажденного до 45 °С мясо-пептонного агара. После застывания среды чашки помещают (вверх дном) в термостат при температуре (30,0±0,5) °С на 72 ч.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.1.3. Обработка результатов
Выросшие на чашках колонии подсчитывают, умножают на кратность соответствующего разведения. За общее количество микроорганизмов в 1 г муки принимают среднее арифметическое результатов двух смежных разведениий.
4.2. Определение присутствия бактерий группы кишечной палочки
4.2.1. Метод основан на способности бактерий группы кишечной палочки расщеплять маннит и лактозу, образовывать на средах "ХБ" и Хейфеца кислые продукты, изменяющие цвет индикаторов, входящих в состав этих сред.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.2.2. По 1 см каждого разведения вносят (по выбору) в пробирки, содержащие по 5 см
среды: Эйкмана, Кесслер, Булира, Хейфеца, "ХБ" или КОДА. Посевы помещают в термостат при температуре 43 °С для первых пяти сред и 37 °С для последней.
4.2.3. Через 24 ч учитывают рост на средах Эйкмана, Булира по помутнению среды и образованию газа, на средах Хейфеца, "ХБ" и КОДА - по изменению цвета сред.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.2.4. Из пробирок, где наблюдается рост микробов, производят посев в количестве 0,1-0,2 см на плотные дифференциально-диагностические среды (Эндо, Левина) и выдерживают в термостате при температуре 37 °С в течение 18-24 ч.
Типичные колонии Е. Соli характеризуются круглой формой, выпуклой или слегка приподнятой в центре поверхностью, ровными краями, розового, красного или малинового цвета с металлическим блеском или без него на среде Эндо и фиолетового или черного - на среде Левина.
Выросшие изолированные колонии (не менее 4) пересевают на мясо-пептонный бульон, выдерживают в термостате при температуре 37 °С в течение 18-24 ч. После этого одну часть пробирок используют для приготовления мазков, посева на дифференциально-диагностические среды, заражения мышей, вторую - для приготовления кипяченого антигена.
4.2.5. У выделенных культур изучают морфологические, культурально-биохимические и патогенные свойства с целью проведения их родовой дифференциации. Культурально-биохимические свойства изучают по комплексу ЛИМАЦ (лактоза+индол+метилрот+реакция фогес Проскауэра-, цитратно-аммонийные соли +).
Одновременно с определением морфологических, культурально-биохимических и патогенных свойств бактерий проводят серологическую типизацию культур кишечной палочки по 0-антигену.
Для приготовления антигена каждую предназначенную для типизации суточную агаровую культуру (пробирку со скошенным агаром) смывают стерильным физиологическим раствором, доводят суспензию бактерий до концентрации 5-6 млрд/см, кипятят в водяной бане в течение 1 ч и ставят реакцию агглютинации на стекле с комплексной 0-сывороткой, разведенной физиологическим раствором в соотношении 1:5.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.2.6. Если комплексные 0-колисыворотки в начальной реакции не агглютинируют антиген убитой нагреванием культуры, то готовят из этого штамма суспензию бактерий и автоклавируют ее при давлении 10 Па (1 атм) в течение 2 ч для разрушения термостабильного А-антигена. Автоклавированный антиген исследуют с сыворотками 08, 09, 0101.
4.2.7. Обработка результатов
При наличии агглютинации дают заключение о присутствии в исследуемой муке энтеропатогенных типов Е. Coli.
Кроме этого, энтеропатогенными признают культуры Е. Coli, которые: