ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

     8 Методы эксплуатационных испытаний жидких питательных сред

8.1 Общие положения

Настоящий раздел описывает количественные и качественные методы эксплуатационных испытаний жидких питательных сред. Блок-схема каждого метода приведена в приложении С.

8.2 Количественный метод эксплуатационных испытаний жидких питательных сред с использованием пробирок (метод разведения до нулевого уровня)

8.2.1 Общие положения

Настоящий метод является основным методом, который допускается использовать для неселективной или селективной жидкой среды. Он также пригоден для проведения эксплуатационных испытаний жидких сред, используемых для подсчета, например, в методах наиболее вероятного числа.

8.2.2 Приготовление серии разведений

- Выбирают репрезентативное количество пробирок (см. 6.3.1).

- Готовят подходящую серию разведений из рабочей культуры целевых или нецелевых микроорганизмов в подходящем разбавителе, как это описано в ISO 6887-1 и ISO 8199, так, чтобы в наибольшем разведении (нулевой уровень) микроорганизмы отсутствовали (например, от 10 до 10). Наиболее часто используют серию десятичных разведений, тем не менее серии разведений с шагом 1/5 или 1/2 также являются пригодными.

- Серию разведений используют в течение установленного времени (см. 5.4.2.3).

- В течение времени выполнения работы переносят заданный объем (например, 0,1 см каждого разведения) на поверхность неселективной агаровой среды и распределяют по поверхности.

- Инкубируют в заданных условиях с целью обеспечения роста конкретного микроорганизма.

- Проводят подсчет количества колоний на поверхности агаровой среды для наименьшего разведения, содержащей не более 150 колоний, а также количество колоний для последующих разведений; результаты записывают.

8.2.3 Методика испытания жидкой среды

- Отбирают количество пробирок с испытуемой средой, соответствующее количеству пробирок серии разведений.

- Используя разведения, приготовленные по 8.2.2 и начиная с наибольшего разведения, инокулируют заданный объем суспензии тест-микроорганизма (например, 0,1 см) в соответствующую пробирку со средой.

- Пробирки инкубируют в условиях, установленных в соответствующем стандарте (см. 5.4.2.6).

- После инкубирования при помощи петли, удерживающей объем материала 10 мм, пересевают материал каждой пробирки с инкубированной средой (при этом каждый раз используют новую петлю) на неселективную агаровую среду.

- Инокулированные слои инкубируют в условиях, обеспечивающих эффективный рост микроорганизмов.

- После инкубирования исследуют каждый посев на наличие или отсутствие роста.

Примечание - Для целевых микроорганизмов, как правило, достаточно использовать разведения от 10 до 10. Для нецелевых микроорганизмов, как правило, достаточными являются разведения от 10 до 10.

8.2.4 Вычисления и интерпретация результатов

Производительность жидкой обогатительной среды является удовлетворительной, если наблюдается выраженный рост целевого микроорганизма (не менее 10 КОЕ из 10 мм материала петли) из разведений, которые позволяют получить менее 100 КОЕ при посеве 100 мм на поверхность среды.

Для селективных жидких сред определяют коэффициент селективности S на основе наибольшего разведения рабочей культуры, демонстрирующего выраженный рост (не менее 10 КОЕ) на слое агара, и наибольшего разведения инокулированной селективной жидкой среды, демонстрирующей отсутствие роста (или рост менее 10 КОЕ) нецелевого микроорганизма на неселективном агаровом слое. Значение S должно быть не менее 2.

Примечание - Дополнительные методы количественного испытания жидких сред применительно к оценке разрабатываемых сред или в сравнительных исследованиях приведены в приложении I.

8.3 Качественный метод эксплуатационных испытаний жидких селективных питательных сред с использованием пробирок
     

    8.3.1 Общие положения

В данном методе используют целевые, нецелевые либо смесь целевых и нецелевых микроорганизмов в одной пробирке.

8.3.2 Методика