ГОСТ 33332-2015 Продукты переработки фруктов и овощей. Определение массовой доли сорбиновой и бензойной кислот методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Приложение Б
(обязательное)
Определение эффективности хроматографической колонки
Б.1 Проверку условий хроматографического разделения осуществляют путем хроматографического измерения градуировочного раствора N 1 (см. таблицу 1).
При настройке хроматографа для обеспечения надежного измерения устанавливают норматив приемлемого разрешения для пар соседних пиков индивидуальных компонентов, определяемых пользователем, в зависимости от типа хроматографической системы, условий измерений и типа продукта.
Б.2 Коэффициент разделения k вычисляют по формуле
, (Б.1)
где - расстояние между максимумами соседних пиков на пробной хроматограмме, мм;
W, W
- значения ширины первого и второго пиков на половине высоты соответствующего пика, мм (см. рисунок Б.1).
Рисунок Б.1 - Параметры, характеризующие эффективность разделения
Число теоретических тарелок (ЧТТ) вычисляют по формуле
, (Б.2)
где 5,54 - коэффициент пропорциональности;
t - время выхода пика, с;
W - ширина пика на полувысоте, с.
Б.3 Эффективность хроматографического разделения признается удовлетворительной, если коэффициент разделения пиков сорбиновой и бензойной кислот составляет не менее 1,3, а число эффективных теоретических тарелок, вычисленное по пику бензойной кислоты, составляет не менее 4000.
Если данное условие не соблюдается, то для достижения требуемой эффективности разделения экспериментальным путем подбирают новые условия хроматографического измерения, т.е. новый состав подвижной фазы (объемную долю метанола в ней) и скорость ее потока. При невозможности достижения требуемых условий эффективности хроматографического разделения проводят определения других хроматографических колонок аналогичным образом.
Б.4 Контроль эффективности хроматографического разделения проводят не реже одного раза в две недели.