ГОСТ 33332-2015 Продукты переработки фруктов и овощей. Определение массовой доли сорбиновой и бензойной кислот методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
8 Порядок проведения измерений
8.1 Условия хроматографических измерений
Измерения проводят при следующих параметрах:
- температура термостата колонки | (25±5)°C; | |
- объем вводимой пробы | от 10 до 20 мм | |
- элюент | по 7.5; | |
- режим элюирования | изократический; | |
- длина волны спектрофотометрического детектора | 235 нм (для бензойной кислоты) и | |
254 нм (для сорбиновой кислоты). |
Скорость подвижной фазы выбирают в соответствии с типоразмерами колонки.
Примечание - При измерении смеси сорбиновой и бензойной кислот рекомендуется проводить детектирование при длине волны 235 нм. При измерении только сорбиновой кислоты допускается использование длины волны детектирования 254 нм, на которой отклик бензойной кислоты очень слабый. Поэтому при измерении только бензойной кислоты детектирование следует проводить при длине волны 235 нм.
В зависимости от типа применяемого хроматографа и хроматографической колонки допускается изменение условий измерений, обеспечивающих требуемое разделение компонентов пробы в порядке, указанном в приложении Б.
8.2 Приготовление градуировочных растворов
Готовят ряд градуировочных растворов по шести уровням, от меньшей массовой концентрации к большей, из аттестованной смеси (см. приложение В) в соответствии с таблицей 1, используя соответствующие пипетки по 5.4 с одной меткой и мерные колбы по 5.21, доводят объем до метки ацетатным буферным раствором, приготовленным по 7.3, и перемешивают.
Градуировочные растворы хранят при температуре не выше 4°C не более одной недели.
Таблица 1 - Приготовление градуировочных растворов для измерения сорбиновой и бензойной кислот
N градуи- | Вместимость мерной колбы, см | Объем аттестованной смеси, взятый для приготовления градуировочного раствора, см | Массовая доля сорбиновой или бензойной кислоты X | Границы погрешности аттестованного значения массовой доли сорбиновой или бензойной кислоты при P=0,95, отн.% |
1 | 100 | 0,50 | 5 | ±2,3 |
2 | 100 | 1,0 | 10 | ±1,5 |
3 | 100 | 5,0 | 50 | ±1,3 |
4 | 50 | 5,0 | 100 | ±1,3 |
5 | 50 | 10,0 | 200 | ±1,2 |
6 | 50 | 25,0 | 500 | ±1,2 |
8.3 Установление градуировочной характеристики (градуировка хроматографа)
Построение и обработку градуировочной зависимости выполняют методом абсолютной градуировки с помощью программного обеспечения хроматографа.
Хроматограммы обрабатывают в соответствии с руководством пользователя программного обеспечения. Регистрируют пики сорбиновой и бензойной кислот. Компоненты идентифицируют по абсолютным значениям времени удерживания.
Проводят измерения всех градуировочных растворов, проводя по три параллельных измерения для каждого уровня, в порядке возрастания массовой концентрации компонентов, полностью заполняя петлю инжектора в условиях, указанных в 8.1. Регистрируют площади пиков, проверяя приемлемость выходных сигналов.
Выходные сигналы признают приемлемыми, если относительное среднеквадратичное отклонение (ОСКО) для каждого уровня градуировочных растворов по трем параллельным измерениям, участвующих в нахождении градуировочной характеристики, вычисленное с помощью программного обеспечения, не превышает 3%.
Площадь пика бензойной или сорбиновой кислоты (среднеарифметическое значение из результатов двух измерений), мВ·с, и их массовая доля в градуировочных растворах X, млн
, находятся в функциональной зависимости вида
=k·X+b, (1)
где k, b - градуировочные коэффициенты в уравнении прямой, вычисляемые методом наименьших квадратов, мВ·с·(млн)
и мВ·с соответственно.
Градуировочную характеристику, вычисленную методом наименьших квадратов, считают линейной, если коэффициент корреляции R составляет не менее 0,995.
Градуировочную характеристику устанавливают заново в случае замены оборудования, колонок, партий реактивов, изменения условий измерений или при неудовлетворительных результатах оперативного контроля, но не реже одного раза в месяц.
Установление градуировочной характеристики с проверкой линейности проводят заново в случаях:
- после введения в эксплуатацию новых или отремонтированных средств измерений;