ГОСТ ISO 16212-2020 Продукция парфюмерно-косметическая. Микробиология. Подсчет дрожжей и плесневых грибов

     12 Нейтрализация антигрибковых свойств продукции

12.1 Общие положения

Приведенные ниже методики подтверждают, что микроорганизмы могут расти в условиях проведения испытания.

12.2 Приготовление инокулята

Перед проведением испытаний проводят посев Candida albicans на поверхность неселективной агаризованной питательной среды Сабуро с декстрозой (SDA). Инкубируют чашки при температуре (32,5±2,5)°С в течение 18-24 ч.

Собирают культуру стерильной петлей с поверхности среды и ресуспендируют в разбавителе (см. 5.2) для приготовления стандартной суспензии с концентрацией около КОЕ/см (количество клеток можно определить, используя спектрофотометр); см. ISO 21148.

Используют данную суспензию и ее разведения в течение 2 ч.

12.3 Пригодность методов подсчета

12.3.1 Принцип выполнения

Смешивают нейтрализованную пробу (исходную суспензию или разведение пробы в зависимости от антигрибковых свойств или растворимости продукции) с разведением эталонного штамма. Высевают на чашку Петри или фильтруют через мембранный фильтр. После инкубации проверяют морфологию колоний и сравнивают полученное количество колоний с количеством колоний на контрольном посеве (без добавления пробы).

Если количество микроорганизмов составляет менее 50% (0,3 log) от количества на контрольном посеве, модифицируют методику (используя другие разбавители, нейтрализаторы или комбинацию того и другого, см. приложение D). При отсутствии роста инокулята результаты испытания признаются недействительными, если только возможная контаминация продукции данным видом микроорганизмов не является маловероятной.

12.3.2 Тест на пригодность метода глубинного посева

Смешивают 9 см исходной суспензии и/или разведения(й) пробы в нейтрализующем разбавителе (или в другом разбавителе, см. 5.2) с 1 см суспензии микроорганизмов с концентрацией от 1000 до 3000 КОЕ/см. Переносят 1 см в чашку Петри (предпочтительно в две чашки) и заливают от 15 до 20 см расплавленной агаризованной питательной среды (см. 5.4.2), выдержанной на водяной бане при температуре, не превышающей 48°С. Параллельно готовят и заливают чашку для контрольного посева, используя тот же разбавитель и ту же суспензию микроорганизмов, но без пробы.

После инкубации в течение 3-5 сут при температуре (25±2,5)°С или в альтернативных условиях (см. примечания к 4.2 и 4.3) подсчитывают колонии на чашках и сравнивают результаты, полученные при испытании, с результатами на контрольном посеве. Разбавитель и метод подсчета считают удовлетворяющими требованиям при разведении 1:10 (когда используется 1 мл исходной суспензии), если количество микроорганизмов, подсчитанных в тесте на пригодность, составляет не менее 50% от количества микроорганизмов на контрольном посеве.

12.3.3 Тест на пригодность метода поверхностного посева

Смешивают 9 см исходной суспензии в нейтрализующем разбавителе (или в другом разбавителе, см. 5.2) с 1 см суспензии микроорганизмов с концентрацией от 10000 до 30000 КОЕ/см (или менее, если распределяется 0,5 или 1 см суспензии). Распределяют не менее 0,1 см суспензии по поверхности застывшей агазированной среды (см. 5.4.2) предпочтительно в двух повторностях. Параллельно готовят и заливают чашку для контрольного посева, используя тот же разбавитель и ту же суспензию микроорганизмов, но без пробы.

После инкубации в течение 3-5 сут при температуре (25±2,5)°С или в альтернативных условиях (см. примечания к 4.2 и 4.3) подсчитывают колонии на чашках и сравнивают результаты, полученные при испытании, с результатами на контрольном посеве. Разбавитель и метод подсчета считают удовлетворяющими требованиям при разведении 1:10 (когда используется 1 см исходной суспензии), если количество микроорганизмов, подсчитанных в тесте на пригодность, составляет не менее 50% (0,3 log) от количества микроорганизмов в контрольном посеве.

12.3.4 Тест на пригодность метода мембранной фильтрации

Смешивают соответствующее количество исходной суспензии или разведения пробы, использованного в испытании (см. 9.3.2.3), с соответствующим количеством стандартной суспензии микроорганизмов, количество клеток в которой соответствует приблизительно 100 КОЕ.

Фильтруют сразу же весь объем и промывают мембранный фильтр, используя необходимый объем воды (см. 5.1), разбавителя (см. 5.2.3) или нейтрализующего разбавителя (см. 5.2.2). Переносят мембранный фильтр на поверхность соответствующей агаризованной питательной среды.

Параллельно готовят контрольный посев при условиях, описанных выше, но без добавления продукции. Фильтруют и промывают контрольный мембранный фильтр при тех же условиях.

После инкубации в течение 3-5 сут при температуре (25±2,5)°С или в альтернативных условиях (см. примечания к 4.2 и 4.3) производят подсчет колоний на мембранных фильтрах и сравнивают с результатами на контрольном мембранном фильтре. Метод мембранной фильтрации и разбавитель считают удовлетворяющими требованиям, если количество микроорганизмов, подсчитанных в тесте на пригодность, составляет не менее 50% (0,3 log) от количества микроорганизмов на контрольном посеве.