ГОСТ ISO 16212-2020 Продукция парфюмерно-косметическая. Микробиология. Подсчет дрожжей и плесневых грибов

     9 Методика

9.1 Общие рекомендации

Подготовку пробы, приготовление исходной суспензии и разведений выполняют с соблюдением правил асептики, используя стерильные материалы, оборудование. В случае приготовления исходной суспензии время между окончанием приготовления суспензии и моментом ее внесения в питательную среду не должно превышать 45 мин, если иное не установлено в утвержденных протоколах или документах.

9.2 Приготовление исходной суспензии

9.2.1 Общие положения

Исходную суспензию готовят из пробы (количество которой не менее 1 г или 1 см) хорошо перемешанной испытываемой продукции.

Регистрируют S, точную массу или точный объем пробы.

Исходная суспензия обычно представляет собой разведение 1:10. Больший объем разбавителя может потребоваться, если предполагается высокий уровень контаминации продукции и/или если в растворе с разведением 1:10 все еще проявляются антигрибковые свойства.

9.2.2 Водорастворимая продукция

Переносят количество S пробы продукции в соответствующий объем (например, 9 см) нейтрализующего разбавителя (см. 5.2.2) или разбавителя (см. 5.2.3).

Регистрируют коэффициент разведения d.

9.2.3 Нерастворимая в воде продукция

Переносят количество S пробы продукции в подходящую лабораторную посуду, содержащую достаточное количество солюбилизирующего компонента (например, полисорбат 80). Растворяют пробу в солюбилизирующем компоненте и добавляют соответствующий объем (например, 9 см) нейтрализующего разбавителя (см. 5.2.2) или разбавителя (см. 5.2.3).

Регистрируют коэффициент разведения d.

9.3 Методы подсчета

9.3.1 Разведения для методов подсчета

Обычно исходная суспензия является первым разведением, в котором выполняется подсчет. При необходимости готовят серию десятикратных разведений (например, 1:10) из исходной суспензии, используя тот же разбавитель (в зависимости от предполагаемого уровня контаминации продукции).

Как правило, подсчет проводят, используя не менее двух чашек Петри, однако существует возможность использовать только одну чашку Петри при проведении рутинных испытаний или если подсчет выполняется на последовательных разведениях одной и той же пробы или исходя из ранее полученных результатов.

9.3.2 Чашечные методы

9.3.2.1 Метод глубинного посева

В чашки Петри диаметром от 85 до 100 мм добавляют 1 см исходной суспензии и/или разведения пробы, приготовленного как при подтверждении метода на пригодность (см. раздел 12), и заливают 15-20 см расплавленной агаризованной питательной среды (см. 5.4.2), которая выдерживалась на водяной бане при температуре, не превышающей 48°С. При использовании чашек Петри большего диаметра количество агаризованной питательной среды пропорционально увеличивают.

Перемешивают исходную суспензию и/или разведение пробы с питательной средой, осторожно вращая или наклоняя чашки для ее равномерного распределения. Дают среде в чашках Петри застыть на горизонтальной поверхности при комнатной температуре.

9.3.2.2 Метод поверхностного посева

В чашки Петри диаметром от 85 до 100 мм помещают от 15 до 20 см расплавленной агаризованной питательной среды (см. 5.4.2), которая выдерживалась на водяной бане при температуре, не превышающей 48°С. При использовании чашек Петри большего диаметра количество агаризованной питательной среды пропорционально увеличивают.

Дают чашкам охладиться, среде застыть в них, например поместив их в ламинарный шкаф или в термостат. Распределяют по поверхности среды отмеренное количество, но не менее 0,1 см, исходной суспензии и/или разведения пробы, приготовленного в соответствии с разделом 12.

9.3.2.3 Метод мембранной фильтрации

Используют мембранный фильтр с номинальным размером пор не более 0,45 мкм.

Переносят соответствующее количество исходной суспензии или разведения пробы, использовавшееся для подтверждения пригодности метода (предпочтительно представительной в количестве не менее 1 г или 1 см продукции) на мембранный фильтр.

Сразу же выполняют фильтрацию и промывают мембранный фильтр (в соответствии с методикой теста на пригодность, см. раздел 12).