ГОСТ Р 56201-2014 Продукты пищевые специализированные и функциональные. Методы определения бифидогенных свойств (с Изменением N 1)

     5 Методы определения бифидогенных свойств

5.1 Метод определения бифидогенных свойств in vitro 1

5.1.1 Сущность метода

Метод оценки in vitro 1 бифидогенной активности специализированных и функциональных пищевых продуктов основан на выявлении чувствительности к воздействию анализируемого продукта тест-штаммов микроорганизмов представителей популяций защитной микрофлоры кишечника человека родов Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp. и Escherichia coli с нормальной ферментативной активностью.

Тест-культуры Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp. и E. coli вносят в модельные субстраты, содержащие анализируемые продукты, или без них (контрольные пробы), методом предельных (исчерпывающих) концентраций, выдерживают при оптимальных условиях инкубации и затем изучают морфологические, кинетические, функциональные и количественные параметры их роста.

Экспериментальную модель составляют из параллельных рядов пробирок с последовательными десятикратными разведениями Lactobacillus, Bifidobacterium и Е. coli в соответствующих питательных средах: среда МРС жидкая для Lactobacillus spp, тиогликолевая, гидролизатно-молочная или кукурузно-лактозная среды для Bifidobacterium spp, среда Кесслер с лактозой для Е. coli. В опытные ряды инокулированных тест-штаммами питательных сред вносят анализируемый продукт; контролем являются десятикратные разведения тест-микроорганизмов без добавления анализируемого продукта (ингредиента).

Расчет концентрации анализируемого продукта (ингредиента), вносимого в модельные среды, проводят таким образом, чтобы она обеспечивала соотношение "Суточная доза анализируемого продукта/объем желудка взрослого человека", при этом за средний объем желудка взрослого человека принимают величину 2250 см.

Пример расчета: Если суточная доза специализированного и функционального пищевого продукта составляет 50 г, его концентрация в модельной среде рассчитывается по формуле: и должна составлять 22,2 мг/см. Для получения этой расчетной концентрации в пробирку с 9 см модельной среды вносят 1 см раствора (взвеси) анализируемого продукта с концентрацией 222 мг/см.

По результатам анализа устанавливают значения предельных разведений тест-культур, в которых имеет место рост микроорганизмов, характерных для представителей соответствующих популяций кишечной микрофлоры, путем регистрации визуальных признаков типичных колоний в средах культивирования и (или) при подтверждающем пересеве на элективные среды, а также наличия клеток типичной морфологии при микроскопии мазков-препаратов.

На основании полученных результатов делается вывод о наличии бифидогенного действия анализируемого продукта (ингредиента) или об отсутствии бифидогенного действия в модели in vitro.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

5.1.2 Проведение анализа

Анализ проводят по схеме:

Контроль: тест-культуры микроорганизмов - Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp. и E. coli.

Ряды пробирок с последовательными десятикратными разведениями тест-культур:

1 ряд - тест-культура Lactobacillus spp. с 10 разведения до 10 разведения, без анализируемого продукта (контроль);

2 ряд - тест-культура Bifidobacterium spp. с 10 разведения до 10 разведения, без анализируемого продукта (контроль);

3 ряд - тест-культура Е. coli с 10 разведения до 10 разведения, без анализируемого продукта (контроль);

4 ряд - тест-культура Lactobacillus spp. с 10 разведения до 10 разведения и 1 см раствора анализируемого продукта расчетной концентрации;

5 ряд - тест-культура Bifidobacterium spp. с 10 разведения до 10 разведения и 1 см раствора анализируемого продукта расчетной концентрации;

6 ряд - тест-культура Е. coli с 10 разведения до 10 разведения и 1 см раствора анализируемого продукта расчетной концентрации.

Инкубирование посевов тест-культуры Е. coli проводят при (37±0,5)°С в течение 24 ч, тест-культур Lactobacillus spp. и Bifidobacterium spp. - в течение 72 ч.

По окончании инкубирования посевов определяют предельные разведения, в которых обнаруживают рост тест-культур микроорганизмов, путем регистрации визуально характерных признаков роста в среде культивирования и при подтверждающем пересеве на дифференциально-диагностические среды, а также путем выявления клеток типичной морфологии при микроскопии мазков-препаратов (см. таблицу 1).

Таблица 1 - Характер роста тест-культур микроорганизмов

(Измененная редакция, Изм. N 1).