МУК 4.2.2870-11
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней
Дата введения 2011-06-01
1. РАЗРАБОТАНЫ Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" Роспотребнадзора (Ю.М.Ломов, Э.А.Москвитина, Н.Р.Телесманич, В.Д.Кругликов, И.Я.Черепахина, В.В.Балахнова, И.В.Архангельская); Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Роспотребнадзора (В.В.Кутырев, Е.С.Казакова, И.Н.Шарова, Н.А.Осина, С.А.Щербакова, Н.И.Смирнова); Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Иркутский научно-исследовательский противочумный институт" Роспотребнадзора (С.В.Балахонов, Л.Я.Урбанович, Л.В.Миронова, Е.С.Куликалова, А.С.Кожевникова); Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт" Роспотребнадзора (В.Н.Савельев); Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Противочумный центр" Роспотребнадзора (В.Е.Безсмертный, С.М.Иванова); Федеральным бюджетным учреждением здравоохранения "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (В.Г.Сенникова, М.В.Зароченцев, В.В.Мордвинова); Федеральным государственным учреждением науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии Роспотребнадзора (И.А.Дятлов, С.Ф.Бикетов, Е.И.Баранова, М.В.Храмов, Е.А.Тюрин); Федеральным государственным бюджетным учреждением "ГИСК им. Л.А.Тарасевича" Минздравсоцразвития (И.В.Борисевич, Л.В.Саяпина).
2. УТВЕРЖДЕНЫ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 25 мая 2011 г. и введены в действие с 1 июня 2011 г.
3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.
1. Область применения
1.1. Настоящие методические указания определяют порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней, формы и методы их взаимодействия, номенклатуру и объем исследования, требования к лабораториям, специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований, материально-техническому обеспечению исследований, биологической безопасности проведения работ.
1.2. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор в Российской Федерации, специалистов противочумных учреждений, органов управления здравоохранением и лечебно-профилактических учреждений.
2. Нормативные ссылки
2.1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".
2.3. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 24.02.2009 N 11 "О представлении внеочередных донесений о чрезвычайных ситуациях в области общественного здравоохранения санитарно-эпидемиологического характера" (Зарегистрировано в Минюсте РФ 10.04.2009 N 13745).
2.4. Приказ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 7.07.2009 N 415н "Об утверждении квалификационных требований к специалистам с высшим и послевузовским медицинским и фармацевтическим образованием в сфере здравоохранения". (Зарегистрирован в Минюсте РФ 9.07.2009 N 14292).
2.6. Санитарные правила "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности": СП 1.2.036-95 (Утв. постановлением Госкомсанэпиднадзора РФ от 28.08.1995 N 14).
2.7. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы "Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами". СанПиН 2.1.7.2790-10 (Утв. постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 9.12.2010 N 163. Зарегистрировано в Минюсте РФ 17.02.2011 N 19871).
2.8. Санитарно-эпидемиологические правила "Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)". СП 1.3.1285-03 (Утв. постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 15.04.2003 N 42 "О введении в действие санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.1285-03". Зарегистрировано в Минюсте РФ 10.05.2003 N 4545).
2.9. Санитарно-эпидемиологические правила "Порядок выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека I-IV групп патогенности (опасности), генно-инженерно-модифицированными микроорганизмами, ядами биологического происхождения и гельминтами". СП 1.3.1318-03 (Утв. постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 30.04.2003 N 85 "О введении в действие санитарно-эпидемиологических правил СП 1.2.1318-03". Зарегистрировано в Минюсте РФ 19.05.2003 N 4558).
2.10. Санитарно-эпидемиологические правила "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней". СП 1.3.2322-08 (Утв. постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2008 N 4 "Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08". Зарегистрировано в Минюсте РФ 21.02.2008 N 11197).
2.11. Санитарно-эпидемиологические правила "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней" Дополнения и изменения N 1 к СП 1.3.2322-08": СП 1.3.2518-09 (Утв. постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 2.06.2009 N 42. Зарегистрировано в Минюсте РФ 8.07.2009 N 14280).
2.12. Санитарно-эпидемиологические правила "Санитарная охрана территории Российской Федерации": СП 3.4.2318-08 (Утв. постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 22.01.2008 N 3 "Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил СП 3.4.2318-08". Зарегистрировано в Минюсте РФ 3.04.2008 N 11459).
2.13. Санитарно-эпидемиологические правила "Профилактика холеры. Общие требования к эпидемиологическому надзору за холерой на территории Российской Федерации": СП 3.1.1.2521-09 (Утв. постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 9.06.2009 N 43 "Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил СП 3.1.1.2521-09". Зарегистрировано в Минюсте РФ 9.07.2009 N 14285).
2.14. Методические указания "Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности" МУ 1.3.2569-09.
2.15. Методические указания "Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии": МУ 3.3.2.2124-06.
2.16. Методические указания "Лабораторная диагностика холеры": МУК 4.2.2218-07.
2.17. Методические указания "Профилактика холеры. Организационные мероприятия. Оценка противоэпидемической готовности медицинских учреждений к проведению мероприятий на случай возникновения очага холеры": МУ 3.1.1.2232-07.
2.18. Методические указания. "Определение чувствительности возбудителей опасных бактериальных инфекций (чумы, сибирской язвы, холеры, туляремии, бруцеллеза, сапа и мелиоидоза) к антибактериальным препаратам": МУК 4.2.2495-09.
2.19. Методические указания "Методы контроля бактериологических питательных сред": МУК 4.2.2316-08.
2.20. Методические указания "Серологические методы в диагностике холеры": МУК 4.2.2315-08. Дополнения к МУК 4.2.2218-07 "Лабораторная диагностика холеры".
3. Перечень сокращений
АБП - антибактериальные препараты
ИФА - иммуноферментный анализ
ЛПУ - лечебно-профилактическое учреждение
МУ - методические указания
МУК - методические указания по контролю
МФА - метод флуоресцирующих антител
ООИ - особо опасные инфекции
ПБА - патогенный биологический агент
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПЧС - противочумная станция
РАО - реакция агломерации объёмная
РА - реакция агглютинации
РИВ - реакция иммобилизации вибрионов
РВА - реакция вибриоцидных антител
СанПиН - санитарные правила и нормативы
СП - санитарные правила
ИХ-тест - иммунохроматографический тест
4. Общие положения
Характеристика болезни и возбудителя холеры
Холера - особо опасная инфекционная болезнь с диарейным синдромом, фекально-оральным механизмом передачи возбудителя инфекции, водным, пищевым и контактным путями распространения.
Возбудитель холеры - холерный вибрион относится к семейству Vibrionaceae, роду Vibrio и виду Vibrio cholerae:
К виду Vibrio cholerae отнесены грамотрицательные, аспорогенные, полиморфные, слегка изогнутые или прямые палочки длиной 1,5-3,0 мкм и шириной 0,2-0,6 мкм, с одним полярно расположенным жгутиком, который длиннее тела клетки в 2-3 раза.
Холерные вибрионы быстро размножаются в 1%-й пептонной воде, образуя через 6-8 ч на поверхности среды нежную пленку. Через 24 ч роста пленка становится грубой, среда слабо мутнеет. На поверхности плотного питательного агара (щелочной агар, рН 8,0) через 18-24 ч инкубации рост холерных вибрионов проявляется в формировании крупных (2-3 мм), гладких, прозрачных колоний с ровным краем, которые легко эмульгируются в физиологическом растворе. В косо проходящем свете они отсвечивают голубоватым цветом. На элективной среде TCBS на зеленом фоне среды колонии вибрионов круглые, гладкие с ровным краем, плоские, желтого цвета. При более длительной инкубации желтый цвет колоний часто переходит в зеленый.
Холерные вибрионы образуют индофенолоксидазу - тест дифференциации от представителей семейства Enterobacteriaceae, ферментируют глюкозу в аэробных и анаэробных условиях до кислоты без газа - тест дифференциации от представителей родов Pseudomonadaceae, декарбоксилируют лизин и орнитин, но не дигидролизуют аргинин - тесты дифференциации от представителей других семейств (Aeromonas spp., Plesiomonas spp., Enhydrobacter spp., Photobacterium spp.) и отдельных видов рода Vibrio.
Помимо этого, холерные вибрионы расщепляют до кислоты без газа сахарозу, маннозу, крахмал, маннит, не расщепляют арабинозу, салицин, дульцит, инозит. В отдельных случаях ферментацию маннозы холерными вибрионами возможно определить только в анаэробных условиях. Холерные вибрионы восстанавливают нитраты в нитриты, образуют индол, разжижают желатину, продуцируют нейраминидазу, лецитиназу, триглицероллипазу.
V. cholerae по наличию специфического О-антигена распределяются на серологические группы. В настоящее время известно 206 серологических О групп холерных вибрионов. Возбудителями холеры являются холерные вибрионы О1 и О139 серологических групп. Холерные вибрионы других не О1/не О139 серологических групп могут вызывать спорадические или групповые случаи диарей, не склонные к эпидемическому распространению.
Холерные вибрионы О1 серогруппы по различиям в полисахаридном компоненте О-антигена делятся на три серовара: Огава, Инаба и Гикошима. Серовар Гикошима не стабилен и реверсирует в один из основных сероваров, преимущественно - Огава. Известен R-антиген холерных вибрионов, описаны штаммы, агглютинирующиеся RO сывороткой и не агглютинирующиеся сыворотками О1, Огава или Инаба.
У холерных вибрионов имеется общий жгутиковый Н-антиген.
Холерные вибрионы в пределах О1 серогруппы делятся на два биовара: классический и эльтор, имеющие существенные фенотипические и генетические отличия. Деление на биовары основывается на чувствительности к холерным диагностическим бактериофагам - классическому и эльтор, чувствительности к 50 ед/мл полимиксина В, агглютинации куриных эритроцитов, образовании ацетилметилкарбинола в реакции Фогес-Проскауэра.
Холерные вибрионы являются носителями умеренных фагов с низкой литической активностью. Известны фаги, активные в отношении холерных вибрионов О1 и не О1, включая О139 серологическую группу, а также с более узким спектром литического действия, в пределах отдельных групп штаммов, например ctx и ctx
холерных вибрионов.
Одним из основных факторов вирулентности (и эпидемической значимости) холерных вибрионов, определяющих тяжесть клинической картины при холере, является холерный энтеротоксин или СТ (от англ. - cholera toxin), синтез которого контролируется кластером генов ctxAB.
Описан ряд дополнительных токсинов: Zot и Асе токсины, цитотоксический комплекс RTX, цитотонический фактор Cef, термостабильный токсин ST, NMDCY токсин, шигаподобный токсин Sit, WО7 токсин, cholix toxin. Не менее важным фактором вирулентности холерных вибрионов являются токсин-корегулируемые пили адгезии или TCP (от англ. - toxin-coregulated pilus) - ключевой фактор колонизации. За синтез пилей TCP отвечают гены tcpA-F, среди них ген tcpA - за биосинтез основной субъединицы пилей.
Нетоксигенные штаммы холерных вибрионов обладают гемолитической активностью, которая включает активность нескольких компонентов: рициноподобного галактозоспецифичного лектина (hlyA) и комплекса ферментов гидролаз, ведущим из которых является липаза (lipА). Гемолитическая активность является ведущим фактором патогенности у штаммов возбудителей холеры О1 и О139 серогрупп, не имеющих ген холерного токсина. Такие штаммы могут вызывать спорадические случаи диареи различной степени тяжести, но не склонны к широкому распространению. Способность к гемолизу эритроцитов барана в тесте Грейга, коррелирующая с липазной активностью, является визуализированным тестом, свидетельствующим о том, что штамм не может вызывать тяжёлую клиническую картину холеры и не способен к широкому эпидемическому распространению.
Понятие эпидемической значимости базируется на определении комплекса показателей:
прямые - выявление гена холерного токсина в ПЦР и определение активности его продукции на кроликах-сосунках;
косвенные - отсутствие гемолитической, липазной активности, поздняя ферментация маннита, высокая адгезивная активность in vitro (на модели эритроцитов).
Холерные вибрионы имеют две хромосомы: первую (или большую размером 2960 т.п.н.) и вторую (или малую размером 1070 т.п.н.). На большой хромосоме V. cholerae расположены гены патогенности: ctxAB, кодирующий биосинтез СТ, гены, определяющие продукцию дополнительных холерных токсинов, гены tcpA-F, кодирующие продукцию TCP, а также гены, необходимые для репликации, транскрипции, репарации ДНК, биосинтеза клеточной стенки и О-антигена. Биосинтез О1 антигена определяет кластер генов, обозначенный как wbe. Продукция О139 антигена кодируется кластером генов, также локализованном на большой хромосоме и имеющим обозначение wbf. Выявление с помощью ПЦР генов wbe и wbf, специфичных для холерных вибрионов О1 и О139 серологических групп, позволяет определить серогруппу возбудителя холеры. На малой хромосоме, помимо генов с неустановленной функцией, локализованы структурные гены hlyA, отвечающие за синтез термолабильного гемолизина, а также остров интегронов, содержащий гены, кодирующие антибиотикоустойчивость, и участвующий в приобретении новых генов. Следует отметить, что ген hlyA присутствует в хромосоме всех штаммов V. cholerae, как способных к биосинтезу термолабильного гемолизина, так и не продуцирующих этот белок. Однако в гене hlyA холерных вибрионов классического биовара, в отличие от такового V. cholerae эльтор, имеется делеция протяженностью 11 п.н., вследствие чего продукция гемолизина вибрионами этого биовара невозможна.
Штаммы холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп, содержащие гены ctxAB и tcpA-F, вызывают холеру и являются эпидзначимыми. Эти штаммы не лизируют эритроциты барана в пробе Грейга. Эпидемически не значимые штаммы холерных вибрионов, не содержащие генов ctxAB и tcpA-F, лизируют эритроциты барана в пробе Грейга. Нетоксигенные (не содержащие гена холерного токсина) ctxAB варианты холерных вибрионов О1, также как и других серогрупп, могут вызывать спорадические (единичные) или групповые (при общем источнике инфицирования) заболевания, не склонные к эпидемическому распространению.
Попробуйте «Техэксперт: Лаборатория. Инспекция. Сертификация» бесплатно