МУК 4.2.2218-07
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Лабораторная диагностика холеры
Дата введения 2007-08-01
1. РАЗРАБОТАНЫ: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю.М.Федоров, Н.Я.Жилина); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" (Ю.М.Ломов, Б.Н.Мишанькин, Л.С.Подосинникова, Л.Г.Воронежская, И.Я.Черепахина, Т.А.Кудрякова, Б.Л.Мазрухо, Л.М.Смоликова, И.В.Рыжко, Р.И.Цураева, Э.А.Москвитина, Б.П.Голубев, С.О.Водопьянов, Е.В.Монахова, В.Д.Кругликов, Н.Р.Телесманич, А.Б.Мазрухо, В.В.Агафонова); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Противочумный Центр" (А.А.Кюрегян, С.М.Иванова, Ю.С.Королев); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" (А.К.Адамов, З.В.Малыхина, Т.В.Бугоркова, Н.И.Смирнова, Л.Ф.Ливанова; А.В.Топорков, С.И.Заднова, Н.А.Осина, Е.С.Казакова, Н.Б.Челдышева, А.В.Осин); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Иркутский научно-исследовательский противочумный институт" (А.С.Марамович, В.С.Ганин, Л.Я.Урбанович, В.И.Погорелов, Л.В.Миронова, Е.С.Куликалова); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт" (В.Н.Савельев); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Причерноморская противочумная станция" (Г.В.Гальцева); Государственным Центром по антибиотикам (С.В.Сидоренко); Российской медицинской академией последипломного образования (Е.А.Ведьмина); ГИСК им. Л.А.Тарасевича (Т.И.Анисимова, Л.В.Саяпина).
2. УТВЕРЖДЕНЫ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 31 мая 2007 г.
3. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН Методических указаний "Лабораторная диагностика холеры" МУ 4.2.1097-02.
1. Область применения
1.1. Методические указания "Лабораторная диагностика холеры" разработаны для внедрения и применения действующих нормативных документов, определяющих требования к эпидемиологическому надзору за холерой в части, касающейся организации и проведения лабораторной диагностики холеры.
1.2. Настоящие методические указания предназначены для специалистов бактериологических лабораторий учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, лечебно-профилактических и противочумных учреждений.
2. Нормативные ссылки
2.3. Санитарные правила "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. СП 1.2.036-95".
2.4. Санитарные правила "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами. СП 1.2.731-99".
2.5. Санитарные правила "Условия транспортировки и хранения медицинских иммунобиологических препаратов. СП 3.3.2.028-95".
2.6. Методические указания "Организация работ при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I-II групп патогенности. МУ 1.3.1794-03".
3. Характеристика возбудителя холеры
Холера - острая инфекционная болезнь с диарейным синдромом, фекально-оральным механизмом заражения, пищевым, водным и контактно-бытовым путями распространения возбудителя. Относится к группе инфекций, борьба с которыми регламентируется Международными медико-санитарными правилами (2005).
Возбудителями холеры являются холерные вибрионы О1 (классического и эльтор биоваров) и О139 серогрупп.
Токсигенные () холерные вибрионы обеих серогрупп вызывают заболевание холерой, склонное к эпидемическому и пандемическому распространению (эпидемически значимые штаммы), нетоксигенные (
) - единичные или групповые заболевания холерой при общем источнике заражения.
У нетоксигенных () штаммов холерных вибрионов возможно присутствие отдельных генов патогенности, среди которых определенную значимость имеет ген
, участвующий в реализации процесса адгезии.
Характеристика генома выделенных холерных вибрионов биологическими методами широко используется для эпидемиологического анализа и оценки эпидемической значимости выделенных штаммов.
4. Организация лабораторных исследований
Диагностические исследования на холеру в регламентированном объеме могут проводить:
- бактериологические лаборатории учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, лечебно-профилактических и противочумных учреждений, имеющие разрешение на работу с микроорганизмами III группы патогенности;
- лаборатории особо опасных инфекций центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора и ведомств, имеющие разрешение на проведение диагностических исследований на холеру;
- лаборатории противочумных учреждений, имеющие разрешение на проведение диагностических исследований на холеру и на работу с возбудителем холеры.
Организация и выполнение диагностических исследований на холеру в лабораториях должны осуществляться в соответствии с требованиями, регламентирующими:
- безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности - для бактериологических лабораторий учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, и лечебно-профилактических учреждений;
- безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности - для лабораторий (отделов) особо опасных инфекций центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, ведомств и противочумных учреждений;
- порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов IV группы патогенности.
Порядок получения лабораториями разрешения на диагностические исследования на холеру определяется действующими нормативными документами о порядке выдачи разрешений на эти виды работ.
В условиях осложнения эпидемиологической обстановки временное разрешение на проведение диагностических исследований на холеру бактериологическим лабораториям учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, и другим, функционирующим в составе лабораторной службы очага, в случае расширения их функциональных обязанностей представляется решением медицинского штаба очага.
4.1. При осуществлении эпидемиологического надзора
4.1.1. Бактериологические лаборатории учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, и лечебно-профилактические учреждения проводят плановые диагностические исследования на холеру материала от больных острыми кишечными инфекциями, определенного контингента здоровых лиц и проб из объектов окружающей среды в объеме, предусмотренном действующими нормативными документами по эпидемиологическому надзору за холерой.
Исследования ведут до установления отрицательного результата анализа или до выделения культуры с характерным для вибрионов ростом на агаровой и полиуглеводной средах и положительной реакцией на оксидазу. Культуры проверяют на чистоту в мазке, окрашенном по Граму, на подвижность и в реакции агглютинации на стекле (далее слайд-агглютинации) с холерными сыворотками О1, Огава, Инаба, РО и О139.
При положительном результате слайд-агглютинации немедленно сообщают в органы Роспотребнадзора в субъекте Российской Федерации, культуру для окончательной идентификации немедленно доставляют в специализированную лабораторию в установленном порядке.
При отрицательном результате слайд-агглютинации:
- неагглютинирующиеся холерными сыворотками О1 и О139 культуры, выделенные от людей, направляют для дальнейшей идентификации в специализированную лабораторию;
- неагглютинирующиеся холерными сыворотками О1 и О139 культуры, выделенные из объектов окружающей среды, идентифицируют на месте или по согласованию передают в учреждение Роспотребнадзора.
- 4.1.2. Лаборатории особо опасных инфекций центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора и ведомств:
- выполняют диагностическое исследование материала от больных и умерших с подозрением на холеру и проб из объектов окружающей среды;
- идентифицируют культуры вибрионов, выделенных в территориальных и ведомственных лабораториях, определяя их таксономическую принадлежность, а также определяют эпидемическую значимость (токсигенность) и антибиотикочувствительность холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп по регламентированным для этих лабораторий тестам;
- осуществляют (или организуют) бактериологический контроль качества питательных сред и других диагностических препаратов, используемых в территориальных лабораториях;
- представляют оперативную информацию о выделении культур холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп;
- в установленном порядке немедленно передают в территориальное противочумное учреждение культуры холерных вибрионов, таксономическая принадлежность или токсигенность которых имеющимися средствами диагностики не определяется;
- в течение 5 дней после окончания идентификации передают в территориальное противочумное учреждение или в головной по проблеме "Холера" Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт все культуры холерных вибрионов О1, О139, независимо от объекта обследования, и других серогрупп при выделении от больных;
- контролируют деятельность территориальных лабораторий, оказывают им методическую помощь по всем вопросам лабораторного обеспечения эпидемиологического надзора за холерой.
4.1.3. Лаборатории противочумных учреждений:
- проводят исследования материала от больных и умерших с подозрением на заболевание холерой, а также проб из объектов окружающей среды;
- подтверждают таксономическую принадлежность культур холерных вибрионов, выделенных на курируемой территории;
- идентифицируют все атипичные культуры холерных вибрионов с использованием дополнительных методов серологической, биохимической и других видов идентификации с целью уточнения таксономической принадлежности;
- определяют эпидемическую значимость (токсигенность) и антибиотикочувствительность культур;
- осуществляют методическое руководство по всем вопросам лабораторного обеспечения эпидемиологического надзора за холерой на курируемой территории;
- в установленном порядке выделенные культуры холерных вибрионов с паспортами передают в территориальный противочумный институт, головной по проблеме "Холера" Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт, одновременно паспорта на эти же культуры направляют в противочумный центр Роспотребнадзора.
Лабораторное обеспечение эпидемиологического надзора за холерой осуществляют в соответствии с действующими нормативными и методическими документами. Профилактические исследования на холеру проводят в течение рабочего дня с использованием соответствующих питательных сред, диагностические исследования материала от подозрительных на холеру больных (трупов) - в условиях круглосуточного режима работы лаборатории.
4.2. При проведении противоэпидемических мероприятий
Организация и регламентирование деятельности лабораторий, а также формирование лабораторной службы в очаге холеры осуществляются в соответствии с действующими нормативными документами по организации и проведению противохолерных мероприятий.
5. Бактериологическое исследование
В системе противохолерных мероприятий значительное место занимает бактериологический анализ, от правильности и своевременности проведения которого зависит характер и объем профилактических и противоэпидемических мероприятий.
Исследования проводят с целью:
- выявления больных холерой и вибриононосителей;
- установления окончательного диагноза при вскрытии трупов лиц, умерших от подозрительного на холеру заболевания;
- обоснования выбора средств этиотропной терапии холеры;
- бактериологического контроля эффективности лечения больных холерой и вибриононосителей;
- бактериологического контроля объектов окружающей среды, в том числе поверхностных водоемов;
- бактериологического контроля эффективности обеззараживания в очаге инфекции.
5.1. Отбор и доставка материала на исследование
Материалом для бактериологического анализа могут служить испражнения, рвотные массы, желчь, трупный материал (отрезки тонкого кишечника и желчный пузырь); предметы, загрязненные испражнениями (постельное и нательное белье и др.); вода, ил, гидробионты, сточные воды, содержимое выгребных туалетов; смывы с объектов окружающей среды, пищевые продукты, мухи и др.
Материал от больного забирает медицинский персонал лечебного учреждения, немедленно после выявления больного и до начала лечения антибиотиками. Руководитель является ответственным за правильность отбора, хранения и своевременность доставки проб в лабораторию.
Необходимо учитывать высокую чувствительность холерных вибрионов к дезинфицирующим средствам и кислотам, возможность антагонистического действия сопутствующей микрофлоры и предполагаемую концентрацию возбудителя в исследуемом материале. Если в материале от больных алгидной формой холеры концентрация возбудителя достигает 10-10
м.к./мл, то в испражнениях больных легкой формой и леченных антибиотиками, реконвалесцентов и носителей количество холерных вибрионов обычно не превышает 10
-10
м.к./г.
Для отбора проб используют чистую стерильную посуду, не содержащую следов дезинфицирующих растворов. Стерилизацию посуды и других средств забора материала проводят автоклавированием, сухим жаром или кипячением в 2%-м растворе пищевой соды.
Материал для исследования должен быть доставлен не позже, чем через 2 ч после его взятия. В случае удлинения сроков доставки используют транспортные среды. Наиболее удобной и достаточно эффективной является 1%-я пептонная вода (рН 8,4±0,1).
В пептонную воду в качестве ингибитора сопутствующей флоры может быть добавлен теллурит калия из расчета 1:100000-1:200000 или моющее средство "Прогресс" в концентрации 0,1-0,2%. В отдельных случаях для транспортирования материала могут быть использованы солевые консерванты (см. раздел 7).
Попробуйте «Техэксперт: Лаборатория. Инспекция. Сертификация» бесплатно