МУК 4.2.2316-08

     

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методы контроля бактериологических питательных сред

     

Дата введения: с момента утверждения

1. Разработаны: Федеральным государственным учреждением науки "Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов имени Л.А.Тарасевича" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (С.М.Суханова, Н.Е.Захарова, Э.И.Конду, И.А.Голубенко).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6 декабря 2007 г. N 3).

3. Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 18 января 2008 г.

4. Введены впервые взамен документов - "Методические указания по применению физико-химических методов контроля питательных сред", (Москва, 1977) и "Методические рекомендации к контролю питательных сред по биологическим показателям" (Москва, 1980).

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для работников организаций, осуществляющих:

изготовление и контроль качества бактериологических питательных сред (диагностических, для культивирования, транспортных и др.) и (или) их основ при серийном промышленном выпуске;

конструирование новых питательных сред;

изготовление сред из отдельных компонентов по прописям, а также могут быть использованы:

- при экспертизе НД и

- при проведении внутрилабораторного контроля качества коммерческих питательных сред.

1.2. Настоящие методические указания распространяются на исследования бактериологических питательных сред отечественного и зарубежного производства.

2. Нормативные и методические ссылки

2.1. Государственная Фармакопея СССР XI издания. Вып.1, 2.

2.2. Методические указания по методам контроля МУК 4.1/4.2.588-96 "Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов, вводимых людям" /Минздрав России. М., 1998.

2.3. Санитарные правила СП 3.3.2.561-96 "Государственные испытания и регистрация новых медицинских иммунобиологических препаратов" /Минздрав России. М., 1998.

2.4. Санитарные правила СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности" /Госкомсанэпиднадзор России. М., 1996.

2.5. Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований: ГОСТ Р 51446-99 (ISO 7218-96).

2.6. Агар микробиологический: ГОСТ 17206-96.

2.7. Методические рекомендации "Определение сроков годности сухих микробиологических сред и питательных основ методом "Ускоренного старения" при повышенной температуре". Махачкала, 1987.

2.8. Водоросли морские, травы морские и продукты их переработки: ГОСТ 26185-84.

2.9. Методические рекомендации к контролю питательных сред по биологическим показателям. М., 1980.

2.10. Методические указания по применению физико-химических методов контроля питательных сред. М., 1977.

2.11. Методические указания "Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам": МУК 4.2.1890-04.

3. Общие положения

3.1. Целью введения настоящих методических указаний является регламентация стандартных методов контроля бактериологических питательных сред.

3.2. Методические указания содержат описание общих методов контроля бактериологических питательных сред. Особенности контроля качества сред, не охватываемые настоящим документом, должны быть описаны в нормативной документации на эти препараты.

4. Термины и определения

4.1. Бактериологические питательные среды (БПС) - препараты, предназначенные для выявления, накопления, культивирования, дифференциальной диагностики, транспортирования и хранения микроорганизмов.

4.2. МИБП (медицинские иммунобиологические препараты) - лекарственные средства, предназначенные для иммунопрофилактики, диагностики и иммунотерапии заболеваний.

4.3. Качество бактериологических питательных сред (основ, добавок) - совокупность свойств продукции, обусловливающих ее способность удовлетворять определенным требованиям в соответствии с назначением.

4.4. Серия препарата - количество препарата, полученного в результате смешивания сухих компонентов питательной среды в мельнице-смесителе или сушки жидкого полуфабриката (для сухих питательных сред) при одноразовой закладке. Для жидких или агаризованных питательных сред, готовых к применению, под серией препарата подразумевают совокупность емкостей, полученных из полуфабриката одной емкости.

4.5. Оценка результатов. Определение положительного или отрицательного результата.

4.6. Разведение культуры. Величина, указывающая во сколько раз была разведена суспензия культуры (например, 10, 10 и т.д.) в отношении исходной, соответствующей 10 ед. по стандартному образцу мутности ФГУН ГИСК им. Л.А.Тарасевича (ОСО-42-28-85 П).

5. Общие указания при оценке качества питательных сред

I. Оценка качества питательных сред и их компонентов проводится с помощью совокупности показателей, выбираемых для контроля среды в соответствии с ее назначением, и включает:*

1. Контроль качества препарата по физико-химическим показателям.

________________

* Используемые в лабораториях коммерческие питательные среды контролируются на предприятиях-изготовителях, поэтому внутрилабораторный контроль их качества проводят только в случаях:

указания на необходимость проведения контроля в приказах Минздрава РФ, инструкции по применению или других документах;

несоответствия клинического диагноза результатам микробиологического исследования в лаборатории;

неудовлетворительного выполнения внешней оценки качества микробиологических исследований;

неудовлетворительного качества среды при использовании в практической работе;

несоответствия величины колоний искомого микроорганизма данному виду бактерий при росте в данной среде;

позднего появления роста культуры в среде, не соответствующего срокам для данного микроорганизма;

отсутствия подавления роста сопутствующей микрофлоры на среде с заявленными ингибирующими свойствами.

Для внутрилабораторного контроля качества коммерческих питательных сред, контроль которых не предусмотрен действующими нормативными документами, необходимо проводить визуальную оценку качества, определять значение рН готовой среды, стерильность каждой приготовленной серии (см. р.7.1.1 "Контроль чистоты розлива"), а также оценивать качество среды с помощью контрольных штаммов.

2. Контроль специфической активности препарата по биологическим показателям.

Перечень показателей, необходимых для контроля основных групп питательных сред, приведен в прилож.1.

Готовую среду засевают культурой (тест-штаммом) того (целевого) микроорганизма, для которого приготовлена среда, и гетерологичных штаммов и визуально (или под малым увеличением микроскопа) изучают характер его роста. Рост микроорганизмов оценивают с помощью количественных (для плотных сред), полуколичественных или качественных методов*.

_______________

* Возможно использование среды сравнения - среды ранее отконтролированной и удовлетворяющей требованиям качества.

Для оценки результатов качественным методом определяют наличие и характер роста каждого из тест-штаммов. Рост целевых тест-штаммов должен быть типичным по цвету, размеру и морфологии колоний; рост нецелевых должен частично или полностью подавляться.

Для оценки результатов количественным методом при интерпретации ингибирующих, накопительных или задерживающих рост свойств среды, подсчитывают количество выросших колоний на тестируемой и контрольной (среде выращивания) средах.

Требования к специфической активности зарегистрированных в РФ бактериологических питательных сред и добавок перечислены в прилож.2.

II. Количество образцов одной серии среды для контроля - не менее трех.

III. Серия среды признается годной только после проведения всех видов контроля.

6. Определение физико-химических показателей

     
6.1. Общие указания для приготовления реактивов

Концентрация. При указании концентрации растворов в процентах, следует подразумевать весобъемные проценты. Например, для приготовления 10%-го раствора следует брать 10 г вещества на 100 мл готового раствора.

Точная навеска. Взвешивание на аналитических весах с точностью до 0,0002 г. Если не указано "точная навеска", то навеску берут с точностью до 0,01 г.

Постоянная масса - разница в массе между последовательными взвешиваниями, не превышающая 0,0005 г.

Оценка результатов. Результаты рассчитывают на основании не менее двух параллельных определений. За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое значений результатов двух параллельных измерений. Допустимое отклонение от средней величины не должно превышать 10%.

Реактивы и титрованные растворы. Реактивы и титрованные растворы, приведенные в настоящих МУК, описаны в соответствующих разделах Государственной Фармакопеи СССР XI издания, вып.2, если нет других указаний.

Квалификация реактивов. Для анализа необходимо использовать реактивы квалификации хч и чда.

Растворитель - вода очищенная (ФС 42-2619-97), если нет других указаний.

Хранение реактивов. Растворы реактивов хранят при температуре 18-20 °С в течение 6 мес., если нет изменений их физических свойств или нет других указаний.

Контрольный опыт (контроль на реактивы). Под контрольным опытом подразумевают определение, проводимое с тем же количеством реактивов и в тех же условиях, но без испытуемого препарата, вместо которого используют растворитель.

6.2. Описание препарата

Внешний вид препарата определяют визуально, указывая:

физическое состояние (жидкость, мелкодисперсный порошок, гель);

цветность*;

прозрачность (для препаратов готовых к применению). Препарат может быть либо прозрачным, либо с незначительной опалесценцией, либо мутный);

гигроскопичность (для сухих препаратов);

светочувствительность (при наличии в составе компонентов, разрушающихся на свету.

_______________

* При описании цвета оттенок указывают перед основным цветом (например, "желтовато-коричневый").

6.3. Определение растворимости

Количество препарата (г), необходимое для приготовления конкретной серии питательной среды, должно растворяться при перемешивании и, если необходимо, при кипячении в течение 2-3 мин.

Препарат считают растворившимся, если в растворе при визуальном наблюдении в проходящем свете не обнаруживаются частицы вещества.

Для препаратов, образующих при растворении мутные растворы, соответствующее указание должно быть приведено в нормативной документации и инструкции по применению.