ГОСТ 34786-2021 Вода питьевая. Методы определения общего числа микроорганизмов, колиформных бактерий, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa и энтерококков (с Поправкой)
Приложение А
(обязательное)
Постановка оксидазного теста и определение грам-принадлежности для подтверждения наличия в пробе воды колиформных бактерий
А.1 Оксидазный тест с тетраметил-п-фенилендиамин гидрохлоридом
В качестве реактива для оксидазного теста используют тетраметил-п-фенилендиамин гидрохлорид.
Мембранный фильтр с выросшими на нем колониями с питательной среды переносят на кружок фильтровальной бумаги большего диаметра, чем фильтр, обильно смоченной реактивом тетраметил-п-фенилендиамин гидрохлоридом для определения оксидазной активности. Оксидазный тест считают положительным, если в течение 1-4 мин появляется окрашивание колоний в фиолетово-коричневый цвет.
В случае необходимости дальнейшей идентификации оксидазоотрицательных бактерий проводят пересев колоний на подтверждающие среды непосредственно с мембранного фильтра, расположенного на кружке фильтровальной бумаги с реактивом. Время пересева не ограничено.
А.2 Оксидазный тест с диметил-п-фенилендиамин дигидрохлоридом и -нафтолом
В качестве реактива для оксидазного теста используют диметил-п-фенилендиамин дигидрохлорид с -нафтолом.
Мембранный фильтр с выросшими на нем колониями с питательной среды переносят на кружок фильтровальной бумаги ненамного большего диаметра, чем фильтр, обильно смоченной реактивом диметил-п-фенилендиамин дигидрохлоридом с -нафтолом для определения оксидазной активности. Оксидазный тест считают положительным, если появляется окрашивание колоний в синий цвет.
Допускается использовать готовые к употреблению диски СИБ-оксидаза, соблюдая сроки хранения.
После появления первых признаков положительного теста (окрашивание колоний в синий цвет), но не позднее чем через 4 мин, мембранный фильтр переносят обратно на питательную среду.
В случае необходимости дальнейшей идентификации оксидазоотрицательных бактерий проводят пересев колоний на подтверждающие среды непосредственно с мембранного фильтра, расположенного на питательной среде.
Посев целесообразно проводить не сразу после определения оксидазной активности, а после выдерживания на питательной среде свыше 5 мин.
А.3 Постановка оксидазного теста способом посева штрихом
Полоску фильтровальной бумаги помещают в чистую чашку Петри и смачивают двумя-тремя каплями одного из указанных выше реактивов для оксидазного теста. Если используют бумажные индикаторные системы (СИБ), то их смачивают дистиллированной водой.