ГОСТ 34786-2021 Вода питьевая. Методы определения общего числа микроорганизмов, колиформных бактерий, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa и энтерококков (с Поправкой)

     11 Методы определения Pseudomonas aeruginosa

11.1 Метод определения Pseudomonas aeruginosa на средах Бонде и "Блеск"

11.1.1 Метод основан на определении наличия или отсутствия Pseudomonas aeruginosa в воде с использованием двух этапов анализа: накопление в жидкой питательной среде Бонде с последующим высевом на подтверждающую плотную среду "Блеск" или агар с цетримидом.

11.1.2 В 500 см исследуемой воды добавляют 50 см среды Бонде 10-кратной концентрации и 2,5 см 0,01%-ного раствора кристаллического фиолетового.

В объем 250 см добавляют 25 см среды Бонде 10-кратной концентрации и 1,25 см 0,01%-ного раствора кристаллического фиолетового.

11.1.3 Посевы инкубируют при температуре (36±2)°С в течение 24 ч. Если при просмотре посевов не отмечено каких-либо признаков роста, посевы оставляют в термостате для дальнейшей инкубации до 48 ч.

(Поправка. ИУС N 4-2022).

11.1.4 При обнаружении во флаконах помутнения среды и наличия на поверхности нежной пленки, как правило, поднимающейся по стенке флакона, не перемешивая, делают посев этой пленки петлей на плотные подтверждающие среды (среда "Блеск" или агар с цетримидом) путем укола в толщу среды и растирания посева вокруг укола.

11.1.5 Посевы инкубируют при температуре (36±2)°С в течение 24 ч.

11.1.6 После инкубации посевов проводят учет результатов:

При наличии Pseudomonas aeruginosa на среде "Блеск" отмечается темно-малиновый, обильный рост колоний с блестящими вкраплениями и, как правило, ореолом просветления вокруг бляшки и, возможно, с запахом земляники.

На среде с цетримидом Pseudomonas aeruginosa растет в виде желтых, зеленовато-желтых, сине-зеленых колоний.

11.1.7 При характерном для Pseudomonas aeruginosa росте на подтверждающей среде в протоколе анализа записывают: "Pseudomonas aeruginosa обнаружены в исследуемом объеме (500 см или 250 см) воды", при отсутствии роста: "Pseudomonas aeruginosa не обнаружены".

Примечание - Среду Бонде нормальной концентрации готовят растворяя в 100 см 0,28 г фосфата натрия, 0,15 г фосфата натрий-аммония, 0,1 г однозамещенного фосфата калия, 0,02 г сульфат магния, размешивают до полного растворения и стерилизуют при 1 атм. в течение 20 мин. Непосредственно перед посевом добавляют 2,0 мл 0,01%-ного водного раствора кристаллического фиолетового. При приготовлении концентрата среды Бонде все компоненты кроме воды добавляют в 10-кратном размере. Концентрат прибавляется к объекту в соотношении 1:10. Для приготовления селективно-дифференциальной среды "Блеск" в расплавленный МПА добавляют 0,3 г аргинина, 0,8 см раствора ТТХ (самостерилизуется после хранения при комнатной температуре в течение 2-3 дней) и 10 см стерильного снятого молока, размешивают и разливают в 6-7 чашек Петри. При отсутствии мясопептонного агара возможно применение упрощенного варианта среды "Блеск": в 100,0 см дистиллированной воды добавляют сухой питательный агар по прописи на этикетке, стерилизуют при 0,5 атм. в течение 15 мин и вносят 10,0 см стерильного снятого молока и ТТХ 8,0 см 10%-ного водного раствора, смешивают и разливают в 6-7 чашек Петри. При необходимости подтверждения Pseudomonas aeruginosa выполняют дополнительные тесты для идентификации.

11.2 Метод определения Pseudomonas aeruginosa с использованием мембранных фильтров

Анализ проводят в соответствии с ГОСТ ISO 16266.