ГОСТ 34786-2021 Вода питьевая. Методы определения общего числа микроорганизмов, колиформных бактерий, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa и энтерококков (с Поправкой)

     9 Методы определения колиформных бактерий, общих колиформных бактерий, бактерий группы кишечной палочки, обобщенных колиформных бактерий, термотолерантных колиформных бактерий и E.coli

Колиформные, общие и обобщенные колиформные бактерии, БГКП, относятся к индикаторной группе бактерий, которая указывает на фекальное загрязнение воды и возможность присутствия возбудителей водоассоциированных бактериальных кишечных инфекций. В очищенной и дезинфицированной воде их обнаружение означает, что обработка была проведена некачественно или произошло вторичное микробное загрязнение.

9.1 Метод определения колиформных бактерий, общих и обобщенных колиформных бактерий, бактерий группы кишечной палочки и E.coli с использованием мембранных фильтров

9.1.1 При анализе питьевой воды системы централизованного водоснабжения высевают 300 см воды (три объема по 100 см), пропуская этот объем не менее чем через два мембранных фильтра. При получении стабильных отрицательных результатов фильтрация 300 см воды допустима через один фильтр. При исследовании воды неизвестной степени бактериального загрязнения следует засевать несколько объемов, например, 10, 40, 100, 150 см воды.

При исследовании питьевой воды нецентрализованного водоснабжения анализируют объем пробы воды не менее 100 см, пропуская через мембранные фильтры объемы 10 и 100 см, размещая от двух до четырех фильтров (в зависимости от диаметра фильтров и чашки Петри) на одной чашке Петри с дифференциальной средой с условием, чтобы фильтры не соприкасались.

При исследовании упакованной питьевой воды, включая природную минеральную, а также воду для использования в алкогольной продукции, анализируют объем пробы воды 250 см, пропуская через мембранные фильтры объемы 50, 100 и 100 или 50 и 200 см, размещая от двух до четырех фильтров на одной чашке Петри с дифференциальной средой с условием, чтобы фильтры не соприкасались.

При фильтровании воды неизвестного качества увеличивают количество фильтруемых объемов для получения изолированных колоний (например, выполняя посев по 1 см из 1-го и 2-го десятикратных разведений). Фильтрующее устройство и мембранные фильтры стерилизуют по 5.8 и 5.9.

Следует начинать с фильтрования проб обеззараженной воды или тех проб, которые предположительно не загрязнены, а затем фильтровать загрязненные пробы.

При фильтровании объема исследуемой воды 1 см необходимо в воронку предварительно налить не менее 10 см стерильной водопроводной воды, а затем внести анализируемую воду с последующим созданием вакуума.

Если вода для исследования с повышенной мутностью, фильтрация больших объемов затруднена, то засевают объемы воды 0,1 см и 0,1 см из разведений засевают прямым посевом на чашки с дифференциально-диагностической средой с последующим растиранием посевов шпателем до полного впитывания влаги в среду.

9.1.2 После фильтрования анализируемой воды мембранные фильтры размещают посевом вверх на одну из селективных дифференциальных сред, например на среду Эндо, среду с тергитолом 7 или другие альтернативные селективные дифференциальные среды, разлитые в чашки Петри, добиваясь полного прилегания фильтров к толще среды, исключая образование пузырьков воздуха.

Примечание - Перед посевом чашки с селективными дифференциальными средами рекомендуется помещать на 10-15 мин в термостат при (44±0,5)°С для прогревания и удаления с поверхности среды влаги.

Лактозный агар с тергитолом 7 используют вместо среды Эндо при исследовании воды с небольшим числом бактерий, при условии, что взвешенные вещества и фоновая микрофлора не оказывают отрицательного влияния на фильтрацию, культивирование и учет бактерий. Среда обладает низкой селективностью, поэтому она пригодна для обнаружения поврежденных и стрессированных клеток бактерий, в том числе с замедленной ферментацией лактозы.

На одну чашку с дифференциальной средой допускается помещать от двух до четырех фильтров (в зависимости от диаметра фильтров и чашки Петри) с условием, чтобы фильтры не соприкасались. Под каждым фильтром на дне чашки делают надпись с указанием объема профильтрованной воды, номера пробы и даты посева. Чашки с посевами помещают в термостат дном вверх и инкубируют при температуре (36±2)°С в течение (24±3) ч.

9.1.3 При отсутствии роста каких-либо колоний на фильтрах или при наличии только пленчатых, губчатых, с неровной поверхностью и краями, плесневых и других нехарактерных для колиформных бактерий колоний выдают отрицательный результат.