ГОСТ 34786-2021 Вода питьевая. Методы определения общего числа микроорганизмов, колиформных бактерий, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa и энтерококков (с Поправкой)
10 Методы определения энтерококков в воде
10.1 Метод определения энтерококков с использованием мембранных фильтров
10.1.1 Отмеренный объем исследуемой воды (100 см) фильтруют через мембранные фильтры с соблюдением требований 5.8 и 5.9. Упакованную питьевую воду, включая природную минеральную, а также воду для использования в алкогольной продукции фильтруют в объеме 250 см
. При исследовании упакованной питьевой воды, включая природную минеральную, а также воду для использования в алкогольной продукции пробы воды фильтруют в объеме 250 см
, пропуская через мембранные фильтры объемы 50, 100 и 100 см
или 50 и 200 см
, размещая от двух до трех фильтров на одной чашке Петри с дифференциальной средой с условием, чтобы фильтры не соприкасались.
При исследовании воды неизвестного качества, если имеется предположение о внесенном загрязнении, дополнительно фильтруют 1 и 10 см воды, чтобы получить рост изолированных колоний.
10.1.2 После фильтрации фильтры переносят, не переворачивая, на одну из дифференциально-диагностических сред (например, среду Сланец-Бартли, энтерококковый агар Chromocult, KF Streptococcus Agar, селективную плотную питательную среду для выделения кишечных энтерококков, готовую к использованию, энтерококковый (азидный) агар, m-EI Chromogenic Agar Base, желчь-эскулиназидный агар), добиваясь полного прилегания фильтра к среде без пузырьков воздуха.
Чашки с посевами помещают в термостат дном вверх и инкубируют в течение 24 ч при температуре (36±2)°С.
При отсутствии роста колоний инкубацию посевов продолжают до 48 ч.
Для учета выбирают фильтры, на которых выросло до 50 колоний.
Подсчитывают колонии, характерные для кишечных энтерококков: выпуклые, с ровными краями, темно-малиновые (Enterococcus faecalis с биоварами) и розовые, светло-розовые, равномерно окрашенные или с темно-красным нечетко оформленным центром (Enterococcus faecium, Enterococcus durans и др.) в зависимости от используемой среды.
Очень мелкие (на пределе видимости невооруженным глазом), плоские разных оттенков, ярко-малиновые с четко выраженным центром и бесцветным ободком колонии не учитывают. Дифференциацию энтерококков от посторонней микрофлоры допускается проводить по морфологии колоний под бинокулярной лупой.
Информация о параметрах инкубации и характере роста колоний энтерококков, необходимая для учета результатов, приведена в таблице 2.
Таблица 2 - Параметры инкубации и характеристика колоний фекальных кишечных энтерококков на плотных питательных средах
Питательная среда | Инкубация посевов | Характер роста колоний кишечных энтерококков | Рост посторонних бактерий (не учитывают) |
Среда Сланец-Бартли | При (36±2)°С, 24-48 ч | Темно-малиновые выпуклые с ровными краями, равномерно окрашенные (Enterococcus faecalis). | Мелкие, плоские, ярко-малиновые с четко выраженным центром и бесцветным ободком |
Энтерококковый агар Chromocult | При (36±2)°С, 24-48 ч | Красные, темно-бордовые, диаметром 0,5-2 мм и розовые | Бесцветные, сине-фиолетовые или бирюзовые колонии. Грамотрицательные бактерии не растут |
КF стрептококковый агар (КF Streptococcus Agar) | При (36±2)°С, 46-48 ч | Красные, розовые | Оранжевые, желтые, белые. Грамотрицательные бактерии ингибируются |
Основа хромогенного агара для энтерококков (m-EI Chromogenic Agar Base) | При (41±2)°С, 18-24 ч | Синие, при добавлении в среду ТТХ красные | Колонии другого цвета не учитывают |
При необходимости подтверждения наличия в пробе воды энтерококков отбирают по две-три колонии каждого типа: