ГОСТ Р ИСО 10993.5-99

Группа Р20

     

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Изделия медицинские

ОЦЕНКА БИОЛОГИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ МЕДИЦИНСКИХ ИЗДЕЛИЙ

Часть 5

Исследование на цитотоксичность: методы in vitro

Medical devices. Biological evaluation of medical devices. Part 5. Tests for cytotoxicity: in vitro methods

ОКС 11.020

ОКСТУ 9403

Дата введения 2002-01-01

     

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским и испытательным институтом медицинской техники (ВНИИИМТ)

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 422 "Оценка биологического действия медицинских изделий"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 29 декабря 1999 г. N 862-ст

3 Настоящий стандарт, за исключением приложения А, представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 10993.5-92 "Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 5. Исследование на цитотоксичность: методы in vitro"

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Введение

Соблюдение положений стандартов серии ГОСТ Р ИСО 10993 "Оценка биологического действия медицинских изделий" позволит обеспечить системный подход к исследованию биологического действия медицинских изделий.

Целью этих стандартов не является безусловное закрепление конкретных методов исследований и испытаний за группами однородных медицинских изделий в соответствии с принятой классификацией по виду и длительности контакта с организмом человека. Поэтому планирование и проведение исследований и испытаний должны осуществлять специалисты, имеющие специальную подготовку и опыт в области санитарно-химической, токсикологической и биологической оценок медицинских изделий.

Стандарты этой серии являются руководящими документами для прогнозирования биологического действия медицинских изделий на стадии выбора материалов, предназначенных для их изготовления, а также для исследований готовых образцов.

В стандарты серии ГОСТ Р ИСО 10993, имеющие групповой заголовок "Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий", входят:

- часть 1 - оценка и исследования;

- часть 3 - исследование генотоксичности, канцерогенности и токсического действия на репродуктивную функцию;

- часть 4 - исследование изделий, взаимодействующих с кровью;

- часть 5 - исследование на цитотоксичность: методы in vitro;

- часть 6 - исследование местного действия после имплантации;

- часть 7 - остаточное содержание этиленоксида после стерилизации;

- часть 9 - основные принципы идентификации и количественного определения потенциальных продуктов деструкции;

- часть 10 - исследование раздражающего и сенсибилизирующего действия;

- часть 11 - исследование общетоксического действия;

- часть 12 - приготовление проб и стандартные образцы;

- часть 13 - идентификация и количественное определение продуктов деструкции полимерных медицинских изделий;

- часть 16 - моделирование и исследование токсикокинетики продуктов деструкции и вымывания.

В настоящем стандарте приведены методы изучения цитотоксичности in vitro: экстракционный, метод прямого контакта и метод опосредованного контакта.

Выбор метода изучения определяет детали приготовления образцов для исследований на клеточных культурах, а также способ, при помощи которого клетки подвергают воздействию образцов или их экстрактов.

Методы исследования, приведенные в стандарте, взяты из международных, национальных стандартов, директив и нормативов.

Одна из методик исследований на токсичность на суспензионной кратковременной культуре подвижных клеток, применяемая в России, приведена в приложении А.

Допускается применять другие методы, обеспечивающие оценку биологического действия медицинских изделий в соответствии с требованиями международных стандартов.

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает методы исследования цитотоксичности медицинских изделий in vitro: экстракционный метод прямого контакта и метод опосредованного контакта. Выбор одного или более методов изучения зависит от природы образца, подлежащего исследованию, участка предполагаемого применения и характера использования.

Данные методы предусматривают проведение инкубации клеточной культуры либо непосредственно, либо путем диффузии, с вытяжками из изделия, и (или) в контакте с изделием.

Данные методы разработаны для определения in vitro биологической реакции клеток млекопитающих по определенным биологическим параметрам.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты, содержащие положения, которые могут рассматриваться как разделы настоящего стандарта.

ГОСТ Р ИСО 10993.1-99 Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Оценка и исследования

ГОСТ Р ИСО 10993.12-99 Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Приготовление проб и стандартные образцы

     3 Определения

В настоящем стандарте используют термины, приведенные в ГОСТ Р ИСО 10993.1 и ГОСТ Р ИСО 10993.12, а также следующие определения:

3.1 материал отрицательного контроля: Материал, который, подвергаясь исследованию в соответствии с настоящим стандартом, не проявляет цитотоксичности.

Примечание - Цель отрицательного контроля - продемонстрировать фоновую реакцию клеток, например полиэтилен высокой плотности - для синтетических полимеров, а стержни из окиси алюминия и керамики - для стоматологических материалов.

3.2 материал положительного контроля: Материал, который, подвергаясь исследованию в соответствии с настоящим стандартом, проявляет цитотоксичность, при этом результаты воспроизводимы.

Примечание - Цель положительного контроля - продемонстрировать соответствующую реакцию тест-системы. Например, стабилизированный оловоорганический поливинилхлорид используют в качестве положительного контроля для материалов и вытяжек, разведения фенола - в качестве положительного контроля для вытяжек.

3.3 контроль реактива: Модельная среда без исследуемого материала, которая подвергается воздействию условий и процедур исследования.

3.4 посуда для культуры: Посуда, включая стеклянные чашки Петри, пластмассовые чашки для культуры, пластмассовые флаконы для культуры или пластмассовые планшеты и микротитровальные пластины.

Примечание - Используют посуду, соответствующую требованиям класса ткани и подходящую для использования с клетками млекопитающих.

     4 Приготовление образца

4.1 Основные положения

Исследование проводят на вытяжке из материала и (или) на самом материале.

Материал должен представлять собой конечный продукт или часть конечного продукта, предназначенного для исследования.

4.2 Приготовление жидких вытяжек из материала

4.2.1 Общие требования

Условия приготовления вытяжек должны приближаться к условиям клинического применения, но быть более жесткими, чтобы определить потенциальную токсическую опасность, не вызывая значительных изменений (расплавление, или растворение кусочков материала, или изменение химической структуры).

Примечания

1 При интерпретации результатов исследований, условия которых были агравированы, необходимо учитывать, насколько эти условия соответствуют условиям реального применения и потенциальной токсичности изделия.

2 Концентрация любого эндогенного или экстрагенного вещества в вытяжке, а следовательно, количество, подвергающееся воздействию клеток, зависит от площади контакта, объема вытяжки, рН, химической растворимости, осмомолярности, встряхивания, температуры и других факторов.

4.2.2 Модельная среда

Для исследований на клетках млекопитающих можно использовать следующие модельные среды:

- культуральную среду с сывороткой;

- культуральную среду без сыворотки;

- 9 г/л хлорида натрия в неионизированной воде;

- воду;

- другую подходящую модельную среду.

Примечание - Модельные среды представлены по мере убывания степени предпочтительности. К другим подходящим модельным средам относят растительное масло и диметилсульфоксид (ДМСО). ДМСО известен как цитотоксичный в определенных тест-системах при концентрации, превышающей 0,5% (по объему).

4.2.3 Условия приготовления вытяжки

4.2.3.1 Приготовление вытяжки следует проводить в стерильных, химически инертных закрытых контейнерах с соблюдением асептики.

4.2.3.2 Время и температура экстракции зависят от характеристик материала и модельной среды:

а) не менее (24±2) ч при (37±2) °С;

б) (72±2) ч при (50±2) °С;

в) (24±2) ч при (70±2) °С;

г) (1±0,2) ч при (121±2) °С.

Условия приготовления вытяжки должны по возможности имитировать условия обычного использования изделия. Наиболее предпочтительны условия приготовления вытяжки, и, в частности, условия приготовления вытяжки с использованием культуральной среды с сывороткой, приведены в перечислении а).

Рекомендованные условия можно применять в соответствии с характеристиками изделия и специфическими условиями применения.

4.2.3.3 При необходимости встряхивают сосуд с вытяжкой, регистрируют и дают пояснения в отчете.

4.2.3.4 Перед приготовлением вытяжки материал режут на маленькие кусочки. Для полимеров используют кусочки размером 10х15 мм. Шовный материал из оплавленного эластомера исследуют в неповрежденном виде.

4.2.3.5 Соотношение площади поверхности материала в квадратных сантиметрах и объема модельной среды в миллилитрах должно быть от 1,25 до 6,0. Площадь поверхности вычисляют на основе общего размера образца, неправильность поверхности и пористость не учитывают. Однако реальные характеристики поверхности учитывают при интерпретации результатов испытания. Если площадь поверхности определить трудно, то используют соотношение массы образца в граммах и объема модельной среды в миллилитрах, лежащее в диапазоне 0,1-0,2 в соответствии с таблицей 1 ГОСТ Р ИСО 10993.12.

4.2.3.6 Вытяжки по возможности следует использовать сразу после приготовления.

Если вытяжки хранят, то стабильность вытяжек в условиях хранения следует проверить соответствующими методами.

Если вытяжку (перед контактом с клетками) фильтруют, центрифугируют или обрабатывают каким-либо другим способом, это необходимо внести в окончательный отчет в соответствии с разделом 9. Подбор рН вытяжки также заносят в отчет. Манипуляции с вытяжкой, например подбор рН, могут повлиять на результат.