4.1. Метод определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов
4.1.1. Сущность метода
Метод основан на высеве разведений определенного количества продукта в агаризованную питательную среду, культивировании посевов в аэробных условиях при температуре (30±1) °С в течение 72 ч, подсчете всех мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов и пересчете их количества на 1 г продукта.
4.1.2. Проведение анализа
По 1 см исследуемого материала из разведении 10 и 10, приготовленных по п.3.3.6, высевают параллельно в две чашки Петри для каждого разведения. При посеве крышку чашки Петри слегка приоткрывают и посевной материал вносят на дно чашки. Не позже чем через 15 мин после внесения материала в чашки его заливают 15-20 см предварительно расплавленной и охлажденной до температуры (45±1) °С питательной среды, приготовленной по пп.3.2.14 или 3.2.15.
Чашки с посевами, залитыми питательной средой, осторожно вращают, чтобы посевной материал равномерно распределился по всей питательной среде. Затем чашки с посевами оставляют на горизонтальной поверхности до полного застывания питательной среды.
После застывания среды чашки помещают в термостат вверх дном и термостатируют при температуре (30±1) °С в течение 72 ч.
4.1.3. Обработка результатов
Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.
На чашках, где выросло от 30 до 300 колоний, подсчитывают все колонии, суммируют и находят среднее арифметическое из них.
Подсчитывать колонии можно с помощью лупы.
Полученное среднее арифметическое число колоний округляют следующим образом:
если число меньше 100, его округляют до ближайшего числа, кратного 5;
если число больше 100 и его последняя цифра 5, его округляют до ближайшего числа, кратного 20;
если число больше 100 и его последняя цифра не 5, его округляют до ближайшего числа, кратного 10.
Количество микроорганизмов в 1 г продукта () вычисляют по формуле
,
где - округленное среднее арифметическое число колоний;
- объем посевного материала, внесенного в чашку, см;
- степень десятикратного разведения продукта.
Результаты анализа выражают числом от 1,0 до 9,9, умноженным нa 10, гдe "" - cоoтвeтcтвyющaя cтeпeнь 10.
Пример подсчета числа клеток микроорганизмов приведен в приложений 3.
4.2. Метод определения бактерий группы кишечных палочек
4.2.1. Сущность метода
Метод основан на высеве определенного количества продукта и (или) его разведений в пробирки с жидкой селективно-диагностической лактозной средой, культивировании посевов в аэробных условиях при температуре (37±1) °С в течение 48 ч, учете пробирок, в которых отмечен рост грамотрицательных коротких палочек, ферментирующих лактозу с образованием кислоты и газа.