ГОСТ 33528-2015 Молоко и молочные продукты. Идентификация белкового состава электрофоретическим методом в полиакриламидном геле (с Поправкой)

Отклонение

Возможные причины

Способы устранения

Полосы по краям геля расположены выше, чем в центре

Центральная часть геля нагревается сильнее краев.

Избыточное напряжение

Центральный резервуар заполнить охлаждающим раствором.

Охлаждающий раствор прокачивать при температуре 10°С-15°С. Уменьшить напряжение

Диффузия лидирующего красителя

Распад раствора белков пробы и/или растворов буферов.

Диффузия

Приготовить растворы из свежих реактивов.

Если полосы белка имеют такой же диффузный характер, как и полоса лидирующего красителя, увеличить силу тока на 25%-50%

Вертикальная исчерченность трека

Избыточная концентрация белков в пробе

Уменьшить концентрацию белков в пробе.

Уменьшить напряжение на 25%

Горизонтальная исчерченность трека

Неполное растворение белков

Полностью растворить пробу.

Центрифугировать

Широкие или размытые полосы или пятна белков

Диффузия в связи с медленной миграцией.

Химические модификации ионными загрязнениями.

Неполное обезжиривание пробы

Увеличить силу тока на 20%.

Деионизовать раствор мочевины.

Полностью удалить жир

Размывание полос в латеральном направлении

Диффузия растворов белков за пределы лунок до включения напряжения

Уменьшить время между внесением пробы и подачей напряжения в электрофоретическую ячейку

Искривление полос

Недостаточная полимеризация геля вокруг лунок.

Наличие солей в пробе.

Неровная поверхность геля

Дегазировать раствор мономеров геля; увеличить молярную концентрацию аммония надсернокислого и N, N, N', N'-тетраметилэтилендиамина на 25%.

Удалить соли диализом.

Проверить стадию взятия проб для приготовления геля, при необходимости заменить реактивы

Лидирующий краситель опускается до нижнего края геля слишком медленно

Высокая концентрация электродного буфера.

Низкое напряжение

Проверить стадию приготовления электродного буфера (при необходимости разбавить буфер), проверить качество дистиллированной воды, заменить реактивы.

Увеличить напряжение на 25%-50% от установленного

Лидирующий краситель опускается до нижнего края геля слишком быстро

Буфер слишком разбавлен.

Высокое напряжение

Проверить стадию приготовления электродного буфера, проверить качество дистиллированной воды, заменить реактивы.

Уменьшить напряжение на 25%-50% от установленного

Наблюдается несовпадение полос в контрольных пробах

Часть белка могла окислиться во время электрофореза или не была полностью восстановлена на стадии подготовки пробы

Приготовить свежие контрольные пробы.

Проверить качество используемых реактивов