ГОСТ 33528-2015 Молоко и молочные продукты. Идентификация белкового состава электрофоретическим методом в полиакриламидном геле (с Поправкой)

     8 Подготовка к проведению анализа

8.1 Приготовление рабочих растворов

8.1.1 Раствор соляной кислоты молярной концентрации 1 моль/дм

В мерную колбу вместимостью 1000 см вносят около 500 см дистиллированной воды и добавляют 90 см концентрированной соляной кислоты плотностью =1,174 г/см (или 85 см концентрированной соляной кислоты плотностью =1,188 г/см), аккуратно перемешивают и доводят полученный объем дистиллированной водой до метки.

Срок хранения раствора соляной кислоты в емкости из полиэтилена с плотно завинчивающейся крышкой при комнатной температуре - не более 3 мес.

8.1.2 Раствор мочевины молярной концентрации 6 моль/дм

В химическом стакане вместимостью 50 см растворяют (18,02±0,01) г мочевины в 30 см дистиллированной воды, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см и доводят полученный объем раствора дистиллированной водой до метки.

Срок хранения раствора мочевины в емкости из полиэтилена с плотно завинчивающейся крышкой при температуре (4±2)°С - не более 1 мес.

8.1.3 Раствор лидирующего красителя

В микроцентрифужную пробирку типа "Эппендорф" вместимостью 1,5 см помещают 0,0040±0,0005 г бромфенолового синего, добавляют 1 см дистиллированной воды и перемешивают на аппарате для встряхивания типа "Вортекс" (до полного растворения красителя).

Срок хранения раствора лидирующего красителя в микроцентрифужной пробирке типа "Эппендорф" при температуре (4±2)°С - не более 1 мес.

8.1.4 Раствор трис-HC1

В химическом стакане вместимостью 100 см растворяют (6,070±0,001) г трис-(гидрооксиметил) аминометана в 50 см дистиллированной воды, доводят раствором соляной кислоты молярной концентрации 1 моль/дм до (8,8±0,1) ед.рН, переливают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят объем раствора до метки.

Срок хранения раствора трис-HCl в емкости из полиэтилена с плотно завинчивающейся крышкой при температуре (4±2)°С - не более 1 мес.

8.1.5 Раствор натрия додецилсульфата

В химическом стакане вместимостью 50 см растворяют (10,00±0,01) г натрия додецилсульфата в 30 см дистиллированной воды, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см и доводят полученный объем раствора дистиллированной водой до метки.

Срок хранения раствора натрия додецилсульфата в стеклянной прозрачной емкости с плотно завинчивающейся крышкой при температуре (4±2)°С - не более 1 мес.

Примечание - При наличии признаков кристаллизации во время хранения, следует нагреть раствор на водяной бане до температуры 40°С-45°С для растворения осадка.

8.1.6 Раствор мономеров полиакриламидного геля

В коническую колбу вместимостью 50 см вносят (5,6840±0,0005) г акриламида, (0,1220±0,0005) г N', N'-метиленбисакриламида, (3,1040±0,0005) г мочевины, добавляют 8,75 см раствора трис-HC1, приготовленного по 8.1.4, и 26 см дистиллированной воды. Перемешивают на магнитной мешалке с электроподогревом при температуре (50±5)°С в течение 30 мин и охлаждают до комнатной температуры.

Срок хранения раствора мономеров для полиакриламидного геля в емкости из полиэтилена с плотно завинчивающейся крышкой при температуре (4±2)°С - не более 1 мес.

Примечание - Количество раствора для полиакриламидного геля дано для одного анализа и получения геля размером 160х160х1 мм.

8.1.7 Раствор электродного буфера

В мерную колбу вместимостью 500 см вносят (4,50±0,01) г трис-(гидрооксиметил) аминометана, (21,60±0,01) г аминоуксусной кислоты и растворяют в 300 см дистиллированной воды, добавляют 7,5 см раствора натрия додецилсульфата, приготовленного по 8.1.5, полученный объем раствора доводят дистиллированной водой до метки, переливают в коническую колбу вместимостью 2000 см и добавляют 1000 см дистиллированной воды.

После изготовления буферный раствор выдерживают 1-2 ч при комнатной температуре и проверяют рН. Пригодный раствор должен иметь (8,3±0,1) ед.рН.

Срок хранения раствора электродного буфера в стеклянной прозрачной емкости с плотно завинчивающейся крышкой при температуре (4±2)°С - не более 1 мес.

Примечание - Объем электродного буфера предусмотрен для одной электрофоретической ячейки с параметрами, указанными в разделе 7. При использовании электрофоретической ячейки другого типа объем электродного буфера должен быть соответственно скорректирован.

8.1.8 Раствор для фиксации и окраски геля

В коническую колбу вместимостью 500 см вносят (0,50±0,01) г кумасси бриллиантового голубого, добавляют 200 см этилового спирта, 50 см уксусной ледяной кислоты и 250 см дистиллированной воды. Содержимое колбы тщательно перемешивают. После полного растворения красителя раствор фильтруют через складчатый бумажный фильтр.