МУК 4.2.1913-04

     

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

     

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

     
Методы количественного определения генетически модифицированных
источников (ГМИ) растительного происхождения в продуктах питания

     

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ: ГУ НИИ питания РАМН (В.А.Тутельян, Е.Ю.Сорокина, О.Н.Чернышева, А.Б.Левицкая), ГУ ЦНИИ эпидемиологии Минздрава России (Г.А.Шипулин, С.Б.Яцышина), Департамент госсанэпиднадзора Минздрава России (А.И.Петухов), Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России (Е.Н.Беляев, И.В.Брагина, Т.В.Воронцова, Т.Н.Потапова, Т.Ф.Авдеенко, С.Ю.Терехова, М.В.Зароченцев), Центр "Биоинженерия" РАН (К.Г.Скрябин, Д.Б.Дорохов, Б.Б.Кузнецов).

2. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 06.03.04.

3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают методы определения количественного содержания ГМИ растительного происхождения в пищевой продукции.

1.2. Методические указания предназначены для применения в лабораториях учреждений санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации, осуществляющих контроль за качеством продовольственного сырья и пищевых продуктов, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, гигиеническую оценку и выдачу санитарно-эпидемиологических заключений, лабораториях других организаций, аккредитованных в установленном порядке на право проведения контроля безопасности пищевой продукции и продовольственного сырья.

1.3. Методические указания являются обязательными при контроле пищевых продуктов на наличие генетически модифицированных источников и применяются на этапах поставки на производство, гигиенической экспертизы, государственной регистрации, закупки, ввоза в страну и реализации.

1.4. Методические указания разработаны с целью обеспечения единого методического подхода для количественного контроля генетически модифицированных источников в пищевых продуктах, продовольственном сырье, пищевых и биологически активных добавках к пище.

2. Общие положения

Методические указания содержат описание методов определения количественного содержания ГМИ растительного происхождения в пищевых продуктах, основанных на идентификации рекомбинантной ДНК с использованием метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени (RealTime PCR).

Описанные методы направлены на выявление регуляторной последовательности промотора 35S из вируса мозаики цветной капусты. Определение количественного содержания этой регуляторной последовательности параллельно с определением количественного содержания референсной последовательности генома растения позволяет проводить анализ количественного содержания ГМИ (в %). Окончательное количественное определение ГМИ в пищевой продукции, разрешенных для реализации населению и использованию в пищевой промышленности в Российской Федерации, проводится с применением методов исследований для конкретных трансформационных событий, описание которых представляется разработчиком в Минздрав России.

В методических указаниях представлены методы определения генетических конструкций для наиболее часто встречаемых на мировом и внутреннем продовольственном рынках генетически модифицированных растений.

Представленные методы состоят из следующих этапов: выделение ДНК из пищевого продукта, проведение амплификации с детекцией в режиме реального времени с использованием специального оборудования, проведение анализа результатов амплификации, расчет процентного содержания генетически модифицированных источников и оформление результатов в документах.

Метод количественного определения сои линии 40-3-2, являющейся доминирующей генетически модифицированной культурой на мировом и внутреннем продовольственном рынках, основан на количественном иммуноферментном анализе модифицированного белка, определяющего устойчивость к глифосату.

Анализ пищевого продукта на содержание ГМИ включает на первом этапе качественное определение ГМИ методом полимеразной цепной реакции (идентификация рекомбинантной ДНК: промотор 35S и/или терминатор NOS). При получении положительного результата проводится определение конкретного ГМИ, который был использован при производстве исследуемого продукта, с целью выявления разрешенных и неразрешенных для реализации в Российской Федерации. В случае решения вопроса о маркировке продукта проводится количественное определение ГМИ (прилож.1).

3. Аппаратура, материалы и реактивы

Допускается использование другого оборудования, инструментов, лабораторной посуды и реактивов с аналогичными техническими характеристиками, разрешенных к применению в установленном порядке.

4. Отбор, хранение и подготовка проб пищевых продуктов для анализа

Отбор проб проводят по государственным стандартам, устанавливающим порядок отбора проб для однородных групп пищевой продукции: ГОСТ 5904, 9163, 12292, 10852, 12430, 13979, 26313, 22617.0, 27668, 26312.1, 9792, 7631.

4.1. Отбор образцов

От партии сырья или сыпучих продуктов отбирают общую пробу следующим образом:

- от исследуемой партии сырья или сыпучих продуктов отбирают не менее 10 образцов проб (по 5-10 г) в одноразовый плотный полиэтиленовый пакет размером 20х30 см с использованием одноразовых хирургических перчаток и перемешивают, формируя общую пробу (50-100 г);

- из общей пробы отбирают среднюю пробу в 10-20 г, помещают в полиэтиленовый пакет с застежкой-молнией размером не более 10x15 см, который, в свою очередь, помещают в одноразовый плотный полиэтиленовый пакет размером 20х30 см, опечатывают и отправляют на анализ.

От партии продуктов плотной консистенции отбирают общую пробу весом 10-50 г в одноразовый плотный полиэтиленовый пакет с застежкой-молнией размером не более 10х15 см, используя одноразовые перчатки и фламбированные (выдержанные в 96%-ном этаноле и обожженные в пламени газовой горелки) инструменты, опечатывают и отправляют на анализ.

Пробы жидких продуктов отбирают в чистые емкости из стекла или пластика с герметично закрывающимися крышками объемом не более 50 см, опечатывают и отправляют на анализ.

При отборе проб составляют акт отбора проб, который вместе с отобранной пробой отправляют в лабораторию.

4.2. Подготовка проб к анализу

Для подготовки проб необходимо использовать одноразовые полипропиленовые пробирки, ступки и пестики, предварительно обработанные хромовой смесью и фламбированные инструменты - пинцеты, скальпели, ножницы.

Пробы сухих гранулированных и сыпучих продуктов отбирают в ступку по 3-5 г и растирают пестиком до гомогенного состояния.

Пробы плотных продуктов (сырых или подвергшихся кулинарной обработке) весом 3-5 г помещают в ступку, измельчают ножницами, затем растирают пестиком до гомогенного состояния.

Пробы продуктов консистенции крахмала весом 100-300 мг помещают в одноразовые пластиковые пробирки и добавляют 1,0 см физиологического раствора. Для анализа необходимо 50-150 мм образца.

Пробы жидкой консистенции отбирают автоматическими микродозаторами с одноразовыми наконечниками в одноразовые пробирки из полипропилена. Для анализа необходимо 50-150 мкл образца.