ГОСТ Р 51257-99 (ДИН 10325-86) Сыры плавленые. Метод определения лимонной кислоты

     8 Проведение испытания

8.1 Подготовка пробы

Перед испытанием пробу измельчают и гомогенизируют на лабораторном измельчителе.

8.2 Приготовление раствора пробы

8.2.1 Навеску гомогенной пробы массой (2,0000±0,0001) г, взвешенную в химическом стакане, смешивают с 60 см горячей дистиллированной воды температурой от 80 до 90 °С.

8.2.2 Смесь перемешивают от 5 до 10 мин магнитной мешалкой.

8.2.3 Охлажденную смесь количественно переносят в мерную колбу и доводят объем смеси до метки дистиллированной водой.

8.2.4 После тщательного перемешивания смеси мерную колбу со смесью выдерживают 10 мин в ледяной бане или в морозильном отделении холодильника по 6.2.

8.2.5 Затем содержимое мерной колбы фильтруют через гофрированный бумажный фильтр. Мутный фильтрат используют в определении по 8.3.

8.3 Определение

Определение проводят при комнатной температуре. Максимум оптической плотности НАДН находится при длине волны 340 нм. При использовании спектрофотометра переменной длины волны измерения проводят в максимуме оптической плотности. При использовании спектрофотометра с ртутной лампой измерения проводят при длинах волн 334 или 365 нм.

Фильтрат по 8.2.5, растворы ферментов и коферментов, а также буферные растворы дозируют мерными пипетками или автоматическими дозаторами.

8.3.1 Контрольное испытание

8.3.1.1 В первую фотометрическую кювету последовательно вносят 1,00 см буферного раствора по 5.1, 0,10 см раствора НАДН по 5.2, 0,02 см суспензии ферментов L-МДГ и L-ЛДГ по 5.3 и 2,00 см дистиллированной воды. Содержимое кюветы перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой и выдерживают при комнатной температуре 5 мин.

8.3.1.2 Измеряют оптическую плотность раствора относительно оптической плотности воздуха.

8.3.1.3 В кювету добавляют 0,02 см раствора ЦЛ по 5.4. Содержимое перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой и выдерживают 10 мин при комнатной температуре.

8.3.1.4 Измеряют оптическую плотность раствора относительно оптической плотности воздуха.

8.3.2 Определение лимонной кислоты

8.3.2.1 Во вторую фотометрическую кювету последовательно вносят 1,00 см буферного раствора по 5.1, 0,10 см раствора НАДН по 5.2, 0,02 см суспензии ферментов L-МДГ и L-ЛДГ по 5.3, 0,10 см фильтрата по 8.2.5 и 1,90 см дистиллированной воды. Содержимое кюветы перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой и выдерживают 5 мин при комнатной температуре.

8.3.2.2 Измеряют оптическую плотность раствора относительно оптической плотности воздуха.

8.3.2.3 В кювету добавляют 0,02 см раствора ЦЛ по 5.4. Содержимое перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой и выдерживают 10 мин при комнатной температуре.

8.3.2.4 Измеряют оптическую плотность раствора относительно оптической плотности воздуха.

Окончание реакции контролируют повторным измерением оптической плотности раствора через несколько минут.

Примечание - При проведении серийных испытаний используют только одну контрольную кювету. Разность оптических плотностей растворов в кювете с пробой должна находиться в интервале от 0,1 до 0,5 (измерения при длине волны 340 нм) или в интервале от 0,1 до 0,8 (измерения при длине волны 334 нм или 365 нм). Если разность оптических плотностей превышает указанные величины, то необходимо разбавить фильтрат по 8.2.5 дистиллированной водой. Фактор разбавления учитывают при расчете массовой доли лимонной кислоты по формуле (6).