5.1 Неселективное предварительное обогащение
Навеску продукта, в массе (объеме) которой нормативно-технической документацией на анализируемый продукт предусматривается отсутствие бактерий рода Salmonella, высевают в забуференную пептонную воду, приготовленную по 4.2.1. Соотношение массы (объема) продукта и забуференной пептонной воды 1:9.
При посеве жидких высококислотных продуктов для предотвращения снижения рН питательных сред на 0,5 и более рН продукта перед посевом доводят до 7,0±0,2.
При посеве твердых высококислотных продуктов доводят рН до 7,0±0,2 в посевах.
Доведение рН проводят асептически с помощью стерильных растворов гидроокиси натрия и соляной кислоты, приготовленных по ГОСТ 10444.1. Количество добавляемого раствора гидроокиси натрия устанавливают опытным путем.
Посевы инкубируют при температуре (36±1) °С в течение 18-20 ч.
5.2 Селективное обогащение
Культуры, полученные после инкубирования по 5.1, пересевают в две среды для селективного обогащения. Для этого по 10 см культуры переносят в 100 см магниевой среды, приготовленной по 4.2.2, и в 100 см тетратионатной среды, приготовленной по 4.2.4, или по 10 см культуры переносят в 100 см селенитовой среды, приготовленной по 4.2.3, и в 100 см тетратионатной среды.
Посевы инкубируют в течение 24-48 ч на магниевой и селенитовой средах при температуре (36±1) °С, а на тетратионатной среде при температуре (43±1) °С.
5.3 Выделение и идентификация культур на агаризованных дифференциально-диагностических средах
Культуры через 24 и 48 ч инкубирования по 5.2 пересевают (по ГОСТ 26670) на три агаризованные среды, приготовленные по 4.2.5: висмут-сульфит агар, среду Плоскирева и среду Эндо (или среду Левина).
Допускается использование одной чашки каждой из сред одновременного высева с двух селективных сред.
Посевы инкубируют при температуре (36±1) °С в течение 24-48 ч.
После 24 ч инкубирования посевов проводят предварительный учет результатов, а после 48 ч - окончательный.
После инкубирования посевов отмечают на дифференциально-диагностических средах рост колоний, характерных для бактерий рода Salmonella:
на висмут-сульфит агаре колонии черные с характерным металлическим блеском, а также зеленоватые с темно-зеленым ободком и с пигментированием среды под колониями;
на среде Плоскирева колонии бесцветные прозрачные, но более плотные, чем на среде Эндо;
на среде Эндо колонии круглые бесцветные или слегка розоватые, прозрачные;
на среде Левина колонии прозрачные, слабо-розовые или розовато-фиолетовые.
При отсутствии в посевах на дифференциально-диагностических средах характерных для бактерий рода Salmonella колоний дают заключение об отсутствии бактерий рода Salmonella в анализируемой навеске продукта.
При наличии хотя бы на одной дифференциально-диагностической среде характерных для бактерий рода Salmonella колоний проводят их дальнейшее изучение.
5.4 Биохимическое подтверждение принадлежности выделенных характерных колоний к бактериям рода Salmonella
5.4.1 Не менее трех характерных колоний с каждой дифференциально-диагностической среды (см. 5.3) пересевают на скошенную поверхность мясо-пептонного агара или среды из сухого питательного агара, приготовленных по 4.2.14, и часть колоний пересевают штрихом по поверхности и уколом в столбик трехсахарного агара, приготовленного по 4.2.6.
Посевы инкубируют при температуре (36±1) °С в течение 24 ч.
5.4.2 Из отобранных по п.5.4.1 для биохимического подтверждения колоний приготовляют мазки и окрашивают по Граму.
Бактерии рода Salmonella являются грамоотрицательными палочками с закругленными концами.
5.4.3 После инкубирования посевов, как указано в 5.4.1, проводят учет результатов ферментации лактозы, глюкозы и сахарозы на трехсахарном агаре:
пожелтение скошенной части среды указывает на ферментацию лактозы или сахарозы или обоих сахаров;