4.1 Приготовление растворов и реактивов
4.1.1 Раствор бриллиантового зеленого концентрации 5 г/дм: 0,5 г бриллиантового зеленого переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
4.1.2 Раствор фенолового красного концентрации 4 г/дм: 0,4 г фенолового красного переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
4.1.3 Реактив Эрлиха: 1,0 г парадиметиламинобензальдегида растворяют в 95 см этилового спирта объемной концентрации 96% и прибавляют 80 см концентрированной соляной кислоты (=1,18-1,19 г/см).
4.1.4 Реактив Ковача: перемешивают 5,0 г парадиметиламинобензальдегида, 25 см концентрированной соляной кислоты и 75 см изобутилового спирта.
4.1.5 Спиртовой раствор -нафтола концентрации 50 г/дм: 5,0 г -нафтола помещают в колбу вместимостью 100 см, растворяют в этиловом спирте объемной концентрации 96% и доводят раствор этиловым спиртом до метки. Раствор готовят непосредственно перед применением.
4.1.6 Спиртовой раствор фенолового красного концентрации 2 г/дм: 0,2 г фенолового красного переносят в колбу вместимостью 100 см, растворяют в этиловом спирте объемной концентрации 50% и доводят раствор этиловым спиртом до метки.
4.1.7 Сухие агглютинирующие адсорбционные поливалентные сальмонеллезные сыворотки готовят перед употреблением по прописи, указанной в прилагаемом к ним наставлении.
4.2 Приготовление питательных сред
4.2.1 Забуференная пептонная вода: 10,0 г пептона, 5,0 г хлористого натрия, 9,0 г двузамещенного фосфорно-кислого натрия (NaHPO·12HO), 1,5 г однозамещенного фосфорно-кислого калия растворяют при нагревании в 1000 см дистиллированной воды, устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 °С 7,0±0,1. Разливают по колбам в количестве, зависящем от навески анализируемого продукта (если навеска равна 25 г, то разливают по 225 см, то есть 1:9), и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
4.2.2 Магниевая среда: готовят путем соединения трех растворов.
Приготовление раствора 1: 8,4 г пептона, 14,3 г хлористого натрия, 40 см дрожжевого экстракта, приготовленного по ГОСТ 10444.1, 2,85 г однозамещенного фосфорно-кислого калия растворяют при нагревании в 1780 см дистиллированной воды.
Приготовление раствора 2: 71,4 г хлористого магния (MgCl·6НО) растворяют при нагревании в 180 см дистиллированной воды.
Раствор 3: берут 1,8 см раствора бриллиантового зеленого, приготовленного по 4.1.1.
Приготовленные растворы соединяют, устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 °С 7,2±0,2, разливают в колбы или флаконы по 100 см и стерилизуют при температуре (112±1) °С в течение 30 мин.
4.2.3 Селенитовая среда: готовят из двух растворов.
Приготовление раствора 1: 5,0 г пептона, 7,0 безводного двузамещенного фосфорно-кислого натрия, 3,0 г безводного однозамещенного фосфорно-кислого натрия, 4,0 г лактозы растворяют при нагревании в 1000 см дистиллированной воды, охлаждают до 45-55 °С, если необходимо, путем изменения соотношения фосфатных солей устанавливают рН 7,0±0,1. Среду разливают по 100 см в колбы или флаконы и стерилизуют текучим паром по 30 мин в течение двух дней или при температуре (112±1) °С в течение 30 мин.
Приготовление раствора 2: 10,0 г кислого селенисто-кислого натрия (NaHSeО) растворяют асептически в 100 см стерильной дистиллированной воды. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.
Приготовление среды: к 100 см раствора 1 прибавляют 4 см раствора 2.
Стерилизация приготовленной среды не допускается, так как при этом происходит редукция кислого селенисто-кислого натрия, выпадает осадок красного цвета и среда становится непригодной.
Селенитовая среда выпускается в сухом виде и готовится по прописи, указанной на этикетке.
4.2.4 Тетратионатная среда (Мюллер-Кауфман)
Приготовление основы среды: в 100 см мясо-пептонного бульона, приготовленного по ГОСТ 10444.1, помещают 4,5 г стерильного углекислого кальция. Углекислый кальций стерилизуют по ГОСТ 10444.1.
Приготовленную основу стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
При приготовлении среды к 100 см основы среды асептически прибавляют:
10 см раствора гипосульфита натрия (NaSO·5НО);
2 см йодного раствора;
0,2 см раствора бриллиантового зеленого;