ГОСТ 33608-2015 Мясо и мясные продукты. Идентификация немясных ингредиентов растительного происхождения методом газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектором (с Поправкой)

     8 Подготовка к испытанию

8.1 Приготовление растворов

8.1.1 Приготовление растворов стеринов массовой концентрации 0,5 мг/см

Взвешивают 25,0 мг индивидуального фитостерина (брассикастерина, кампестерина, стигмастерина, -ситостерина), переносят в мерную колбу вместимостью 50 см и доводят до метки метанолом.

Растворы хранят в холодильнике при температуре минус (18±2)°С в течение 1 мес.

8.1.2 Приготовление смеси градуировочных растворов стеринов

Для определения стеринов из индивидуальных растворов массовой концентрации 0,5 мг/см готовят смесь градуировочных растворов массовой концентрации 100 мкг/см (раствор 1), 50 мкг/см (раствор 2), 25 мкг/см (раствор 3), 10 мкг/см (раствор 4), 1 мкг/см (раствор 5).

Для приготовления раствора 1 градуированной пипеткой в мерную колбу вместимостью 50 см переносят соответственно по 10 см индивидуального раствора стерина и тщательно перемешивают.

Для приготовления градуировочного раствора 2 в хроматографическую виалу переносят 0,5 см градуировочного раствора 1 и 0,5 см метанола.

Для приготовления градуировочного раствора 3 в хроматографическую виалу переносят 0,5 см градуировочного раствора 2 и 0,5 см метанола.

Для приготовления градуировочного раствора 4 в хроматографическую виалу переносят 0,2 см градуировочного раствора 2 и 0,8 см метанола.

Для приготовления градуировочного раствора 5 в хроматографическую виалу переносят 0,1 см градуировочного раствора 4 и 0,9 см метанола.

Растворы хранят в холодильнике при температуре (4±2)°С в течение 7 сут.

8.1.3 Приготовление раствора гидроокиси калия молярной концентрации (KOH)=10,0 моль/дм

Взвешивают 56,0 г гидроокиси калия, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до метки.

Готовый раствор хранят в конических колбах с притертыми пробками, при комнатной температуре не более месяца.

8.2 Подготовка пробы

8.2.1 Щелочной гидролиз пробы

Пробу продукта массой 5-10 г выделяют жир по ГОСТ 23042 гексаном или петролейным эфиром. Полученный жир помещают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 100 см и добавляют 10 см раствора гидроокиси калия (см. 8.1.3). Колбу соединяют с обратным холодильником, помеoают в водяную баню и нагревают при температуре (80±2)°С в течение 30 мин, периодически перемешивая содержимое колбы. После этого содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры.

8.2.2 Экстракция стеринов

В колбу приливают 40 см дистиллированной воды и 30 см диэтилового эфира, перемешивают, сливают в делительную воронку вместимостью 500 см и дают отстояться в течение 5 мин. После расслаивания нижний водно-спиртовой слой сливают в коническую колбу вместимостью 100 см, а верхний эфирный слой оставляют в делительной воронке. Переливают водно-спиртовой слой в другую делительную воронку, добавляют 30 см диэтилового эфира, встряхивают, отстаивают в течение 5 мин и после расслаивания верхний эфирный слой приливают к эфирному экстракту в первой делительной воронке.

Эфирный экстракт промывают дистиллированной водой, не взбалтывая, порциями по 50 см, отбрасывая нижний водный слой, повторяя данную процедуру трижды.

Промытый эфирный экстракт фильтруют в круглодонную колбу вместимостью 100 см через складчатый фильтр со слоем безводного сернокислого натрия (10-15 г), помещенный в коническую воронку. Эфир отгоняют на роторном испарителе при температуре не выше 30°С под вакуумом.

Сухой остаток растворяют в 0,5 см метанола, пропускают через мембранный фильтр и переносят в виалу из темного стекла вместимостью 2 см для проведения измерения.