ГОСТ 33277-2015 Продукция соковая. Определение массовой концентрации каротиноидов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

     8 Проведение измерений

8.1 Условия хроматографических измерений

Измерения проводят при следующих условиях:

- температура термостата колонки: (20±5)°С (при отсутствии термостата допускается проведение измерений при температуре окружающего воздуха, приведенной в разделе 6);

- рабочая длина волны светопоглощения: 450 нм (для спектрофотометра) или диапазон волн светопоглощения 190-600 нм (для фотодиодной матрицы);

- объем вводимой пробы: 5-20 мм;

- режим элюирования: изократический;

- скорость потока: 1,0 см/мин.

Проверку эффективности хроматографического разделения каротиноидов в данных условиях осуществляют путем измерения раствора с массовой концентрацией каротиноидов 5 мг/дм (см. таблицу 2, раствор N 3). В случае ручного ввода пробы петлю инжектора полностью заполняют подготовленным раствором N 3. Эффективность хроматографического разделения признают удовлетворительной, если коэффициент разделения пиков лютеина и бета-каротина составляет не менее 1,3, а число эффективных теоретических тарелок, вычисленное по пику бета-каротина составляет не менее 4000. Если данное условие не соблюдается, то для достижения требуемой эффективности проводят замену хроматографической колонки на аналогичную новую. Контроль эффективности хроматографического разделения проводят не реже одного раза в две недели.

В зависимости от типа применяемого хроматографа и хроматографической колонки допускается изменение условий измерений, обеспечивающих требуемое разделение компонентов пробы в порядке, указанном в настоящем разделе.

8.2 Градуировка хроматографа

Для установления градуировочной характеристики в инжектор хроматографа дозируют рабочие градуировочные растворы, приготовленные в соответствии с таблицей 2, и регистрируют их хроматограммы в условиях, приведенных в 8.1.

Для каждого градуировочного раствора выполняют два параллельных измерения в условиях повторяемости. Компоненты идентифицируют по абсолютным значениям времени удерживания.

Вычисляют с помощью компьютерной программы обработки данных или вручную методом наименьших квадратов градуировочные коэффициенты и устанавливают градуировочную характеристику для площади пика каждого каротиноида в градуировочном растворе

,                                                          (1)

где - площадь пика каротиноида (среднеарифметическое значение из результатов двух измерений) при измерении i-го градуировочного раствора, AU·c;

C - массовая концентрация каротиноида в i-ом градуировочном растворе, мг/дм;

b, k - градуировочные коэффициенты в уравнении прямой, вычисленные методом наименьших квадратов.

Градуировочную характеристику, вычисленную методом наименьших квадратов, считают приемлемой, если значение квадрата коэффициента корреляции R для каждого каротиноида составляет не менее 0,990.

Градуировочную характеристику строят заново в случае замены оборудования, колонок, партий реактивов или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям результатов контроля стабильности, но не реже одного раза в месяц.

8.3 Контроль стабильности градуировочной характеристики

Проверку градуировочной зависимости проводят перед каждой новой серией измерений. Допускается проводить контроль только по одному из каротиноидов, чередуя их.

Измеряют два градуировочных раствора, приготовленных по 7.3.2, с массовой концентрацией каротиноидов близкой к началу и концу диапазона измерений в тех же условиях, в которых была установлена градуировочная характеристика.

Регистрируют хроматограммы каждого градуировочного раствора в тех же условиях, в которых была установлена градуировочная характеристика.

Измеренное таким образом значение массовой концентрации каротиноидов сравнивают с реальным содержанием каротиноидов в градуировочных растворах по условию (2).

Градуировочную характеристику считают стабильной в случае, если для каждого градуировочного раствора выполняется условие

,                                      (2)

где С - - массовая концентрация каротинода в i-том градуировочном растворе, измеренная по градуировочной характеристике, мг/дм;