ГОСТ ИСО 21569-2009 Продукты пищевые. Методы анализа для обнаружения генетически модифицированных организмов и производных продуктов. Методы качественного обнаружения на основе анализа нуклеиновых кислот (с Изменением N 1)

Приложение С
(справочное)

     
Методы, специфичные к генетической конструкции

С.1 Специфичный к генетической конструкции метод обнаружения модифицированных последовательностей ДНК из генетически модифицированной сои GTS 40-3-2 (соевые бобы RoundUp Ready®)

С.1.1 Общие положения

Этот метод предназначен для обнаружения генетически модифицированной, устойчивой к глифосату сои линии GTS 40-3-2 (RoundUp Ready®) в сырье и переработанных продуктах [8], [11] путем амплификации однокопийной последовательности длиной 172 п.н., представляющей область стыка между промотором 35S вируса мозаики цветной капусты и сигнального гена хлоропласта Petunia hybrida, предшествующей последовательности гена EPSPS из Agrobacterium.

_______________

RoundUp Ready - это зарегистрированная торговая марка компании Monsanto. Эта информация приводится для ознакомления пользователей настоящего стандарта и ни при каких условиях не может служить рекомендацией или одобрением этого продукта организацией ISO.

Эта конструкция используется и в других ГМО.

Этот метод невозможно использовать для разделения сои линии GTS 40-3-2 и селекционных сортов со сложным геномом, полученных при скрещивании сои GTS 40-3-2 и других модифицированных линий сои, за исключением применения метода на отдельных зернах и на растениях, для которых можно подтвердить наличие/отсутствие последовательностей, происходящих от других трансформационных событий.

С.1.2 Метрологическая аттестация и критерии выполнения

С.1.2.1 Совместные сличительные испытания

Этот метод был метрологически аттестован в совместном сличительном испытании [8], проведенном под руководством рабочей группы "Разработка методов идентификации пищевой продукции, произведенной с использованием технологий генной инженерии" Немецкого федерального института защиты здоровья потребителей и ветеринарной медицины (BgVV). Количество участников, а также количество образцов устанавливали в соответствии с критериями ISO 5725-2. Для выделения ДНК использовали метод ЦТАБ, описанный в ISO 21571:2005, А.3 (однако вес анализируемой части образца составлял 100 мг).

Данные совместных сличительных испытаний приводятся в таблице С.1.

Таблица С.1 - Результаты совместных сличительных испытаний

С.1.2.2 Молекулярная специфичность

С.1.2.2.1 Общие положения

Это приложение удовлетворяет требованиям, изложенным в разделе 7.

Метод был разработан для целевой последовательности, описанной в ссылке [8]. Информация о генетической конструкции, внесенной в геном сои, приводится в ссылке [31].

С.1.2.2.2 Теоретическая часть

Поиск по базам данных (база данных GenBank®, BlastN® 2.2.1, по состоянию на 1 июля 2001 г.) не обнаружил гомологии целевой последовательности ДНК с немодифицированными линиями сои, а также с другими сельскохозяйственными растениями. Более того, набор праймеров был подобран для амплификации специфической последовательности ДНК, присутствующей только в искусственной, не встречающейся в природе области стыка.

С.1.2.2.3 Экспериментальная часть

При проведении ПЦР с использованием ДНК, выделенной из немодифицированных соевых бобов, картофеля, томатов, кукурузы и сахарной свеклы [32] или генетически модифицированных линий кукурузы Event 176 (Bt 176), Bt 11, Т 25 и MON 810, не наблюдали амплификации.

С.1.2.3 Предел обнаружения

При определении абсолютного предела обнаружения основывались на следующих предположениях: имеется только одна копия генетической конструкции на гаплоидный геном (база данных AGBIOS: http://www.agbios.com), а размер гаплоидного генома сои составляет 1,13x10 п.н. (см. [5]). Значение абсолютного предела обнаружения в перемолотых бобах определили как 40 эквивалентов гаплоидного генома [32] с 50 нг ДНК из соевых бобов с относительным содержанием ГМО по массовой фракции 0,1%.

Относительный предел обнаружения определили как равный или больший массовой фракции 0,1% соевых бобов в соевой муке (сертифицированный образец стандартного состава IRMM-410R, произведенный IRMM, Гиль, Бельгия) [9]. Было также показано, что с помощью этого метода возможно обнаружить 0,45% GTS 40-3-2 в соевой муке после выпечки [33].

С.1.3 Адаптация