ГОСТ ИСО 21569-2009 Продукты пищевые. Методы анализа для обнаружения генетически модифицированных организмов и производных продуктов. Методы качественного обнаружения на основе анализа нуклеиновых кислот (с Изменением N 1)

Приложение А
(справочное)

     
Методы, специфичные к целевым таксонам

А.1 Метод, специфичный к целевому таксону, для определения компонентов, полученных из соевых бобов

А.1.1 Общие положения

Описана стандартная процедура определения видоспецифичного однокопийного гена, встречающегося в соевых бобах (Glycine max).

Этот метод используется для оценки амплифицируемости ДНК-продуктов, в состав которых входят соевые бобы.

А.1.2 Метрологическая аттестация и критерии выполнения

А.1.2.1 Совместные сличительные испытания

Этот метод был метрологически аттестован в совместных сличительных испытаниях [8], [9], организованных рабочей группой "Разработка методов идентификации пищевой продукции, произведенной с использованием технологий генной инженерии" Немецкого федерального института защиты здоровья потребителей и ветеринарной медицины (BgVV) в соответствии со статьей 35 Федерального закона Германии о пищевых продуктах. Для выделения ДНК использовали метод ЦТАБ, описанный в ISO 21571:2005, А.3 (однако вес анализируемой части образца составлял 100 мг).

Данные совместных сличительных испытаний приводятся в таблице А.1.

Таблица А.1 - Результаты совместных сличительных испытаний

А.1.2.2 Молекулярная специфичность

А.1.2.2.1 Общие положения

Это приложение удовлетворяет требованиям, изложенным в разделе 7.

   Метод был разработан для целевой последовательности, описанной в базе данных GenBank®, доступ N K00821 = М30884.

_______________

GenBank и BlastN - это примеры представленных на рынке программных продуктов, которые могут быть использованы для оценки специфичности. Эта информация приводится исключительно для ознакомления пользователей настоящего стандарта и ни при каких условиях не может служить рекомендацией или одобрением этих продуктов организацией ISO. Допускается использование аналогичных программ, если они позволяют получать такие же результаты.

А.1.2.2.2 Теоретическая часть

В качестве целевой последовательности из баз данных генов был выбран ген соевого лектина Le1 [10].

Поиск по базам данных (NCBI BlastN®, European Molecular Biology Laboratory (EMBL), по состоянию на 28 сентября 2001 г.) не обнаружил сходства последовательностей ДНК с другими сельскохозяйственными растениями. Однако GM03 дал 100%-ное совпадение последовательностей со следующими пунктами баз данных: АХ033509 (последовательность 17 из патента DE19906169), АХ033507 (последовательность 15 из патента DE19906169) и АХ033501 (последовательность 9 из патента DE19906169), в то время как GM04 совпадало только с доступом N АХ033509 (последовательность 17 из патента DE19906169). Обратите внимание на то, что доступ N М30884 - это то же самое, что и доступ К00821, - элемент базы данных GenBank®, первоначально внесенный в базу в 1993 году.

_______________

        GenBank и BlastN - это примеры представленных на рынке программных продуктов, которые могут быть использованы для оценки специфичности. Эта информация приводится исключительно для ознакомления пользователей настоящего стандарта и ни при каких условиях не может служить рекомендацией или одобрением этих продуктов организацией ISO. Допускается использование аналогичных программ, если они позволяют получать такие же результаты.

Количество копий целевой последовательности не определяли, однако предполагалось, что это однокопийный ген.

А.1.2.2.3 Экспериментальная часть

При проведении ПЦР с использованием ДНК, выделенной из других сельскохозяйственных растений (бобовых, зерновых и овощных культур), а также из говядины и свинины, не наблюдали амплификацию. Метод ПЦР для соевых бобов показал свою высокую специфичность к ДНК соевых бобов [10], [11].

А.1.2.3 Предел обнаружения