ГОСТ 32307-2013 Мясо и мясные продукты. Определение содержания жирорастворимых витаминов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (Переиздание)

     7 Проведение измерений

7.1 Условия проведения хроматографического анализа подбираются в зависимости от вида применяемого жидкостного хроматографа и хроматографической колонки.

В качестве примера могут быть приведены следующие условия хроматографического определения жирорастворимых витаминов, выполненные на жидкостном хроматографе.

_________________     

В настоящем стандарте используется жидкостной хроматограф Dionex Ultimate 3000 с колонкой Supelco SUPELCOSIL LC-PAH 5 мкм 4,6х150 мм. Данная информация является рекомендуемой, приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не исключает возможности использования других средств измерений с аналогичными свойствами.

0,02 см исследуемого раствора вводят в подготовленный к работе жидкостный хроматограф. Элюирование проводят в изократических условиях в течение 12 мин.

Состав элюента: смесь метанола и воды в объемном соотношении 92:8. Скорость подачи элюента 2,0 см/мин.

Температура колонки 30°С. Детектирование проводят при следующих длинах волн:

325 нм - для витамина ;

270 нм - для витаминов и ;

285 нм - для витамина .

7.2 Идентификацию пиков хроматограммы исследуемого раствора проводят сравнением с хроматограммой градуировочного раствора по двум параметрам: времени удерживания и спектральному отношению (отношение высот хроматографического пика на разных длинах волн).

7.3 Если время удерживания и спектральные отношения пиков хроматограммы исследуемого раствора совпадают в пределах допускаемых отклонений (0,05, 3%) с временем удерживания и спектральными отношениями соответствующих им пиков хроматограммы градуировочного раствора, результат идентификации считают положительным.

7.4 Если спектральные отношения совпадают в пределах допускаемого отклонения, а разница времени удерживания пиков хроматограммы исследуемого раствора и хроматограммы градуировочного раствора больше допускаемого отклонения, проводят хроматографический анализ соответствующего градуировочного раствора по 7.1 и сравнивают время удерживания. В случае совпадения в дальнейшем в качестве образца используют новую хроматограмму.

В случае повторного несовпадения времени удерживания используют метод добавок, для чего к исследуемому раствору добавляют известные количества определяемых витаминов с концентрацией, сравнимой с концентрацией "сомнительных" пиков, и анализируют по 7.1.

Если на хроматограмме пробы с добавкой площади "сомнительных" пиков увеличились на величину, соответствующую величине добавки, эти пики относятся к определяемым компонентам.

Если на хроматограмме пробы с добавкой наряду с "сомнительными" пиками присутствуют пики, время удерживания и спектральные отношения которых совпадают с соответствующими параметрами добавленных компонентов, сомнительные пики не относятся к определяемым компонентам.

7.5 Если время удерживания соответствующих пиков хроматограммы исследуемого раствора и хроматограммы градуировочного раствора совпадают в пределах допускаемого отклонения, а разница спектральных отношений больше допускаемого отклонения, настоящая методика неприменима к данному образцу.

7.6 Массовая концентрация витаминов в исследуемом растворе не должна превышать предельных значений концентраций градуировочных растворов. В случае превышения исследуемый раствор, содержащий витамины, с помощью механического дозатора разбавляют метанолом в рассчитанное количество раз и проводят хроматографический анализ разбавленных растворов. Если массовая концентрация витаминов в исследуемом растворе ниже предельного значения градуировочного раствора, необходимо увеличить массу пробы.