ГОСТ 31792-2012 Рыба, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Определение содержания диоксинов и диоксинподобных полихлорированных бифенилов хромато-масс-спектральным методом

     7 Проведение испытаний

7.1 Экстракция ПХДД/ДФ

Извлечение ПХДД/ДФ из образца проводится методом колоночной экстракции. Навеску гомогенизированного образца взвешивают в стакане вместимостью 250 см с точностью до 0,01 г, добавляют к нему 120-150 г безводного и тщательно перемешивают стеклянной палочкой. Образец с добавленным выдерживают в течение 1 ч, периодически перемешивая, при необходимости добавляя некоторое количество . Перетирают образец пестиком в стеклянной ступке. Полностью высушенный образец представляет собой легко пересыпающуюся массу.

Для анализа рыбы и тканей с низким содержанием липидов используют навеску 15-20 г, при анализе печени, гонад, мышц с высоким содержание липидов - 6-8 г.

Экстракцию образца проводят в стеклянной колонке с внутренним диаметром 30 мм и высотой рабочей части 30 см, имеющей в своей нижней части впаянный стеклянный фильтр Шотта и снимающийся тефлоновый кран. На стеклянный фильтр помещают слой кварцевой ваты СКВ и уплотняют ее стеклянной палочкой. Помещают 1/3 массы образца в колонку; в следующую 1/3 массы сначала вносят 50 мкл изотопно-меченого раствора суррогатного стандарта , перемешивают стеклянной палочкой, а затем помещают в колонку; после этого в колонку переносят остаток пробы и уплотняют содержимое колонки постукиванием.

Экстрагируют ПХДД/ДФ, пропуская через колонку с пробой 300 см смеси гексан-дихлорметан (1:1) со скоростью 3-4 мл/мин. Вытекающий из колонки экстракт-элюат собирают в круглодонную колбу вместимостью 500 см.

Экстракт-элюат концентрируют на роторном испарителе при температуре 50 °С до объема около 50 см. Взвешивают грушевидную колбу 100 см и количественно переносят в нее сконцентрированный экстракт, обмывая стенки колбы смесью гексан-дихлорметан (1:1). Экстракт концентрируют на роторном испарителе до объема около 1 см, добавляют около 1 см дихлорметана и очищают методом колоночной хроматографии.

Пробу рыбьего жира массой 1 г растворяют в 20 см смеси гексан-дихлорметан (1:1) и очищают методом колоночной хроматографии.

7.2 Очистка экстракта методом колоночной хроматографии
     

    7.2.1 Отделение липидов и высокомолекулярных соединений методом гель-фильтрации

Из подготовленной колонки Bio-Beads SE-X3 сливают через тефлоновый кран растворитель и, не допуская высыхания верхнего слоя, промывают колонку, пропуская последовательно 35 см смеси метанол-дихлорметан (1:4) и 65 см смеси гексан-дихлорметан (1:1). Смесь такого же состава, гексан-дихлорметан (1:1), используют в качестве элюента.

После окончания промывки сорбента под колонку ставят мерный цилиндр вместимостью 50 см и вносят в колонку сконцентрированный экстракт. Стенки колбы из-под экстракта обмывают не менее пяти раз элюентом и смывки также вносят в колонку.

Пропускают элюат со скоростью 1 мл/мин, регулируя скорость тефлоновым краном. После пропускания 50 см элюата (фракция ) заменяют цилиндр и отбирают целевую фракцию . Когда объем целевой фракции достигнет 50 см, цилиндр с собранной фракцией извлекают из-под колонки.

Переносят фракцию в грушевидную колбу и концентрируют на роторном испарителе до объема ~1 см и далее очищают на колонке с активированным и модифицированным силикагелем.

7.2.2 Очистка на колонке с силикагелем

Помещают в стеклянную колонку с внутренним диаметром 8 мм и длиной рабочей части 200 мм, с резервуаром для элюата в верхней части слой кварцевой ваты заполняют в следующем порядке:

- 1 см акт;

- 1 см ;

- 1 см акт;

- 3 см ;

- 1 см акт;

- слой безводного на 1,0-1,5 см по высоте колонки.

Каждый вносимый слой уплотняют постукиванием.

Для смачивания сорбентов через колонку пропускают 10 см гексана. Под колонку подставляют чистую грушевидную колбу вместимостью 50 см для сбора элюата. Затем вносят сконцентрированную фракцию , собранную с колонки Bio-Beads SE-X3. Элюируют аналиты 50 см гексана. Стенки колбы обмывают гексаном не менее пяти раз, смывки вносят в колонку последовательно. Элюат концентрируют на роторном испарителе до объема около 1 см.

7.2.3 Очистка на активированном оксиде алюминия

Используют колонку с внутренним диаметром 6 мм и длиной рабочей части 150 мм, с резервуаром для элюента в верхней части. На слой кварцевой ваты вносят 5 г сорбента. Пропускают через колонку 5 см гексана. После прохождения гексана в колонку вносят сконцентрированный элюат, собранный после колонки с силикагелем. Пропускают через колонку 50 см смеси гексан-дихлорметан (97:3), обмывают стенки колбы элюатом не менее пяти раз, смывы вносят в колонку последовательно. Отобранную фракцию утилизируют. Далее пропускают через колонку 50 см смеси гексан-дихлорметан (40:60) (об.), отбирая в чистую грушевидную колбу целевую фракцию , содержащую ПХДД/ДФ. Фракцию концентрируют на роторном испарителе под вакуумом до объема около 0,5 см.

7.2.4 Концентрирование для инструментального анализа

Сконцентрированную фракцию после колонки с активированным оксидом алюминия количественно переносят с помощью гексана во флакон mini-Vial с оттянутым донышком. Избыток гексана осторожно удаляют потоком азота. Когда объем растворителя во флаконе достигнет примерно 100 мкл, автоматическим дозатором добавляют 20 мкл раствора внутреннего стандарта в декане и продолжают отдув до объема добавленного декана. Герметизируют флакон тефлонированной прокладкой и крышкой и передают для инструментального анализа.

7.3 Выполнение измерений