ГОСТ Р 53910-2010 (ИСО 10253:2006) Вода. Методы определения токсичности по замедлению роста морских одноклеточных водорослей Phaeodactylum tricornutum Bohlin и Sceletonema costatum (Greville) Cleve

Приложение ДВ
(обязательное)

Методы подсчета численности клеток водорослей

ДВ.1 Определение плотности (численности) клеток водорослей методом прямого счета в камере Горяева

Подсчет плотности (численности) клеток водорослей в камере Горяева (см. рисунок ДВ.1) проводят следующим способом:

     
а - общий вид камеры Горяева

     
b - вид сбоку камеры Горяева

     
с - увеличенный фрагмент сетки для подсчета клеток водорослей. Выделен один большой квадрат

     
Рисунок ДВ.1 - Счетная камера Горяева

Содержимое колбы с водорослями перемешивают вручную, затем пипеткой отбирают суспензию водорослей (аликвоту) и наносят по одной капле на верхнюю и нижнюю части сетки счетной камеры Горяева. Затем камеру накрывают покровным стеклом, которое притирают по бокам до появления колец интерференции.
     
     Примечания
     

    1 Взятую в пипетку каплю суспензии водорослей необходимо очень быстро нанести на поверхность сетки, пока клетки водорослей не успели осесть в нижней части пипетки.
     

    2 Нанесенную на поверхность сетки каплю суспензии водорослей следует быстро накрыть покровным стеклом и притереть его во избежание оседания клеток водорослей из капли.
     

    3 После притирания покровного стекла и при подсчете клеток водорослей под микроскопом необходимо следить за тем, чтобы жидкость под покровным стеклом была распределена равномерно.
     

    4 Камеры Горяева обычно имеют две сетки, разделенные желобком. В таких камерах наносят параллельно две капли суспензии водорослей.
     
     Капли суспензии водорослей наносят не подряд из одной пипетки, а при двукратном взятии суспензии в пипетку из одной и той же колбы.
     
     
     Через 1-2 мин после оседания клеток водорослей камеру Горяева помещают под объектив микроскопа и подсчитывают количество клеток водорослей во всех 25 больших квадратах сетки.
     
     Примечания
     

    1 После подсчета клеток водорослей камеру Горяева сразу же тщательно моют водопроводной водой и протирают мягкой тканью (например, фланелью).
     

    2 Подсчет числа клеток водорослей в камере Горяева рекомендуется проводить при плотности (численности) клеток (1,0-2,5)·10 клеток/см, так как при большей плотности (численности) клеток водорослей в суспензиях подсчет трудоемок и менее точен.

Плотность (численность) клеток водорослей в 1 см суспензии водорослей рассчитывают по формуле

,                                               (ДВ.1)

где - суммарное количество клеток водорослей в учтенных больших квадратах сетки;

- коэффициент пересчета кубических миллиметров в кубические сантиметры.

Плотность (численность) клеток водорослей подсчитывают в каждой колбе, отбирая по две аликвоты.

За результат подсчета плотности (численности) клеток водорослей принимают среднеарифметическое значение не менее двух определений для каждой заданной кратности разбавления (концентрации) анализируемой пробы, в том числе и контрольной пробы, которое вычисляют с допускаемым отклонением не более ±7%.

ДВ.2 Определение плотности (численности) клеток водорослей с использованием метода флуориметрии