ГОСТ Р 53910-2010 (ИСО 10253:2006) Вода. Методы определения токсичности по замедлению роста морских одноклеточных водорослей Phaeodactylum tricornutum Bohlin и Sceletonema costatum (Greville) Cleve

    5 Метод А

5.1 Сущность метода

Сущность метода заключается в регистрации снижения плотности (численности) клеток морских одноклеточных водорослей Phaeodactylum tricornutum Bohlin в анализируемой пробе исследуемого объекта относительно контрольной пробы, определении ее токсичности и токсикологических показателей при тестировании в течение 72 ч (96 ч) при переменном воздействии света и темноты и постоянной температуры.

Продолжительность тестирования 72 ч указана для определения токсичности и токсикологических показателей анализируемых проб природной морской воды, воды эстуариев и сточной воды, а также анализируемых проб веществ.
     
     Примечание - Допускается проводить определение эффективной кратности разбавления проб сточной воды (концентрации вещества), вызывающей снижение плотности (численности) клеток водорослей на 50%, при увеличенной продолжительности тестирования до 96 ч [96 ч ЭКР (96 ч ЭК)].
     
     
     Продолжительность тестирования 96 ч указана для определения токсичности и токсикологических показателей анализируемых проб отработанных буровых растворов, твердых промышленных отходов и донных отложений.

5.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы, материалы

Климатостат, обеспечивающий поддержание температуры (20±2) °С и освещенность 3000-6000 лк.
     
     Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228, высокого класса точности с ценой деления (дискретностью отсчета) не более 0,01 г, пределом взвешивания не более 210 г.

рН-метр любого типа, обеспечивающий измерения рН в диапазоне от 3 до 10 единиц рН с допускаемой погрешностью ±0,05 единиц рН.
     
     Термометр лабораторный с диапазоном измерения от 0 °С до 50 °С, с ценой деления шкалы 0,5 °С.
     
     Оксиметр любого типа, с допускаемой погрешностью измерения не более 0,5 мг О/дм.
     
     Прибор для измерения минерализации (солености) любого типа (например, карманный рефрактометр-солемер с автотермокомпенсацией) с допускаемой погрешностью измерения общей минерализации (солености) ±3,0 г/дм [± 3·10 (±3‰)].

Пипетки автоматические (дозаторы) любого типа вместимостью 0,1; 0,2 см с допускаемой погрешностью аттестованного значения ±1,0%.
     
     Пипетки по ГОСТ 29227, вместимостью 1, 2, 5, 10 см, с ценой деления 0,1 см.
     
     Микропипетки по ГОСТ 29227, вместимостью 0,1; 0,2 см, с ценой деления 0,01 см.
     
     Колбы мерные по ГОСТ 1770, 2-25-2, 2-50-2, 2-100-2.

Колбы стеклянные (конические) лабораторные по ГОСТ 25336, вместимостью 0,25; 1 и 2 дм.

Счетная камера (камера Горяева).

Микроскоп биологический типа МБР или МБИ, обеспечивающий увеличение в 100-200 раз.

Примечание - Допускается определять состояние роста культур водорослей, используя фотоэлектроколориметр, спектрофотометр, флуориметр (далее - приборы), обеспечивающие возбуждение флуоресценции водорослей в диапазоне 400-500 нм; регистрацию флуоресценции в диапазоне 650-750 нм.

Мешалка магнитная.
     
     Устройство для встряхивания любого типа (например, орбитальный шейкер, качалка-мешалка).
     
     Центрифуга лабораторная медицинская.
     
     Сушильный электрический шкаф общелабораторного назначения.
     
     Аквариумный микрокомпрессор любого типа, например АЭН-4.
     
     Шпатели металлические по ГОСТ 19126.
     
     Холодильник бытовой, обеспечивающий поддержание температуры минус (20±1) °С и от 2 °С до 4 °С.
     
     Ступки и пестики фарфоровые по ГОСТ 9147.
     
     Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
     
     Фильтры обеззоленные "белая лента".

Фильтры мембранные с диаметром пор 0,45; 3,5 мкм.

Установка для фильтрования любого типа.
     
     Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336, вместимостью 10 см.
     
     Цилиндры по ГОСТ 1770, вместимостью 25, 50, 100, 1000 см, второго класса точности.
     
     Стаканы стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336, вместимостью 50, 100, 500, 1000 см.
     
     Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или деионизированная.

Примечание - Для получения дистиллированной воды используют только аппараты из стекла или кварца.

Природная или искусственная морская вода минерализацией 33 г/дм (соленостью 33‰) (далее - вода для разбавления).

Примечание - Если в качестве воды для разбавления используют природную морскую воду, то ее отбирают вдали от берега с глубины 3-5 м и транспортируют в лабораторию в стеклянных или полиэтиленовых емкостях. При этом допускается для приготовления питательной среды и водных вытяжек использовать природную морскую воду, отобранную в условно чистом месте района исследования.

В лаборатории природную морскую воду фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм, чтобы удалить взвешенные вещества и организмы, и хранят в темном месте при комнатной температуре не более одного года.

Питательная среда (среда Гольдберга), приготовленная в соответствии с требованиями приложения А.

Примечания

1 Емкости, используемые для приготовления питательной среды, должны быть изготовлены из стекла.

2 Питательную среду используют для культивирования водорослей, приготовления контрольной пробы и анализируемых проб разбавлением.

Тест-организмы: морские одноклеточные водоросли Phaeodactylum tricornutum Bohlin.

Примечания
     

    1 Методы культивирования водорослей Phaeodactylum tricornutum Bohlin приведены в приложении ДА.
     

    2 Допускается хранение водорослей Phaeodactylum tricornutum Bohlin на агаризованной питательной среде Гольдберга при температуре от 2 °С до 4 °С не более 12 мес без потери их жизнеспособности.

Модельный токсикант: калий двухромовокислый по ГОСТ 4220, ч.д.а.
     
     Калий хлористый по ГОСТ 4234, х.ч.
     
     Калий азотнокислый по ГОСТ 4217, х.ч.
     
     Натрий хлористый по ГОСТ 4233, х.ч.
     
     Натрий сернокислый по ГОСТ 4166, х.ч.
     
     Натрий углекислый кислый по ГОСТ 4201, х.ч.
     
     Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный по ГОСТ 245, х.ч.
     
     Кобальт хлористый 6-водный по ГОСТ 4525, х.ч.
     
     Кальций хлористый, безводный, х.ч.
     
     Магний хлористый 6-водный, по ГОСТ 4209, х.ч.
     
     Марганец (II) хлористый 4-водный по ГОСТ 612, х.ч.
     
     Натрий кремниевокислый 5-водный, х.ч.
     
     Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч.
     
     Натрий азотнокислый по ГОСТ 4168, х.ч.
     
     Железо (III) хлорид 6-водный по ГОСТ 4147, х.ч.
     
     Цинк сернокислый 7-водный по ГОСТ 4174, х.ч.
     
     Медь (II) сернокислая 5-водная по ГОСТ 4165, х.ч.
     
     Кислота азотная по ГОСТ 4461, х.ч.
     
     Кислота борная по ГОСТ 9656, х.ч.
     
     Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч.
     
     Тиамин гидрохлорид.
     
     Биотин.
     
     Витамин В (цианокобаламин).

5.3 Подготовка к тестированию