ГОСТ Р 53910-2010 (ИСО 10253:2006) Вода. Методы определения токсичности по замедлению роста морских одноклеточных водорослей Phaeodactylum tricornutum Bohlin и Sceletonema costatum (Greville) Cleve

    6 Метод Б

6.1 Сущность метода

Сущность метода заключается в регистрации замедления скорости роста клеток морских одноклеточных водорослей Phaeodactylum tricornutum Bohlin или Sceletonema costatum (Greville) Cleve в анализируемой пробе исследуемого объекта относительно контрольной пробы, определении ее токсичности и токсикологических показателей при тестировании в течение 72 ч при постоянном воздействии света и температуры.

6.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы, материалы - по 5.2 со следующими дополнениями:

Фильтры мембранные с порами диаметром 0,2 мкм.

Автоклав, обеспечивающий рабочее давление (0,11±0,02) МПа и температуру (120±2) °С.

Тест-организмы: морские одноклеточные водоросли по 5.2 или Sceletonema costatum (Greville) Cleve (ССАР 1077/1 С, NIVA ВАС 1).

Примечание - Методы культивирования водорослей приведены в приложении ДА.

Питательная среда, приготовленная в соответствии с требованиями приложения А.

Примечание - Для длительного содержания водорослей Sceletonema costatum (Greville) Cleve и приготовления питательной среды для культивирования необходимо применение природной морской воды (см. 5.2), поскольку питательная среда, приготовленная на искусственной морской воде (см. 5.3.2), не всегда обеспечивает достаточный рост этих водорослей для тестирования.

Модельный токсикант по 4.2 или 3,5-дихлорфенол, ч.д.а.

Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б) по ГОСТ 10652, х.ч.

Цинк сернокислый 7-водный по ГОСТ 4174, х.ч.

Медь (II) сернокислая 5-водная по ГОСТ 4165, х.ч.

Тиамина гидрохлорид, х.ч.
     
     Биотин.
     
     Калий фосфорнокислый, х.ч.
     
     Натрий азотнокислый по ГОСТ 4168, х.ч.
     
     Натрий кремниевокислый 5-водный, х.ч.

6.3 Подготовка к тестированию - аналогично 5.3, при этом подготовку анализируемых проб сточных вод проводят в соответствии с требованиями приложения ДГ.

Примечание - При необходимости определения физиологической чувствительности тест-организмов [в т.ч. водорослей Sceletonema costatum (Greville) Cleve (ССАР 1077/1 С, NIVA ВАС 1)] по отношению к модельному токсиканту 3,5-дихлорфенолу ее проводят аналогично модельному токсиканту калию двухромовокислому (см. 5.3.4), но с использованием данных, приведенных в таблице ДД.1 (приложение ДД).

6.4 Проведение тестирования - аналогично 5.4 со следующими уточнениями:

6.4.1 Тестирование проводят в течение (72±2) ч в помещении с регулируемой температурой (20±2) °С при постоянном воздействии равномерного белого освещения в диапазоне от 6000 до 10000 лк на расстоянии 0,35 м от поверхности анализируемых проб в колбах при непрерывном и легком взбалтывании анализируемых проб.

Примечание - Требуемая освещенность может быть достигнута с использованием люминесцентных ламп мощностью 300 Вт универсального белого (естественного) света, то есть номинальный цвет эталона цвета 2 (цветовая температура 4300 К).

6.4.2 При предварительном тестировании анализируемой пробы используют по одной колбе для каждого разбавления (концентрации) пробы.

6.4.3 Окончательное тестирование проводят с анализируемыми пробами, которые приготовлены с использованием коэффициента между разбавлениями (концентрациями) не более 3,2 (например, 1,0; 1,8; 3,2; 5,6 и 10,0 мг/дм).

6.4.4 Количество добавленной во все колбы (включая контрольную пробу) суспензии водорослей в экспоненциальной фазе роста должно обеспечить начальную плотность (численность) клеток водорослей в пробе не более 10 клеток/см; для Sceletonema costatum (Greville) Cleve рекомендуется более низкая начальная плотность (численность) клеток (в три-пять раз менее), так как клетки этих водорослей большего объема.

Примечание - Исходная плотность (численность) клеток водорослей в начале тестирования должна быть достаточно низкой, чтобы обеспечить экспоненциальный рост в контрольной пробе за период проведения всего тестирования.

Для приготовления контрольной пробы используют питательную среду по А.2.2 (приложение А).

6.4.5 Если для определения плотности (численности) клеток водорослей используют спектрофотометр или флюорат [см. ДВ.2 (приложение ДВ)], то для каждого анализируемого разбавления (концентрации) пробы готовят в отдельных емкостях фоновые растворы без разбавлений и без водорослей (например, исследуемые пробы воды прозрачные, окрашенные или мутные), которые будут служить фоном при проведении измерений.

Примечание - При тестировании окрашенных или мутных проб с использованием водорослей может возникнуть интерференция, ослабляя свет, необходимый для роста клеток водорослей. В таком случае измеряют интенсивность флуоресценции пробы без водорослей (фоновые растворы) и полученное значение вычитают из значения интенсивности флуоресценции полученного при измерении пробы с водорослями.

6.5 Обработка результатов тестирования - по 5.5 с учетом расчетов эффективной кратности разбавления (концентрации), как указано ниже.

6.5.1 Построение графической зависимости скорости роста клеток водорослей от продолжительности тестирования