Точный
Статус документа
Статус документа

ГОСТ Р 53910-2010 (ИСО 10253:2006) Вода. Методы определения токсичности по замедлению роста морских одноклеточных водорослей Phaeodactylum tricornutum Bohlin и Sceletonema costatum (Greville) Cleve

Приложение А
(обязательное)

     

Приготовление питательных сред

А.1 Приготовление питательной среды для метода А
     

    А.1.1 Приготовление исходных растворов для питательной среды Гольдберга

Исходные растворы N 1 - N 4 для приготовления питательной среды Гольдберга готовят в мерных колбах вместимостью 100 см, куда вносят реактивы в количествах, указанных в таблице А.1, и затем содержимое колб доводят до метки дистиллированной водой (см. 5.2).



Таблица А.1

Номер исходного раствора

Состав раствора

Масса (навеска) реактива на 100 см дистиллированной
воды, г

Объем раствора, используемый для приготовления питательной среды по А.1.2, см

1

Калий азотнокислый по ГОСТ 4217 (KNO)

10,1

2,0

2

Натрий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 245 (NaHPO)

1,421

0,5

3

Марганец хлористый 4-водный по ГОСТ 612 (MnCl·4HO)

0,01979

1,0


Кобальт хлористый 6-водный по ГОСТ 4525 (CoCl·6HO)

0,02379


4

Хлорид железа 6-водный по ГОСТ 4147 (FeCl·6HO)

0,02703

1,0



Исходные растворы N 1 - N 4 хранят при температуре от 2 °С до 4 °С не более одного года, при помутнении растворов их заменяют.

А.1.2 Приготовление питательной среды Гольдберга

В колбу вместимостью 2000 см вносят 1000 см отфильтрованной природной (см. 5.2) или искусственной (см. 5.3.2) морской воды и стерилизуют на водяной бане в течение 20 мин при температуре 75 °С - 80 °С, затем содержимое охлаждают, выдерживают при комнатной температуре в течение 24 ч и снова стерилизуют на водяной бане. После охлаждения в колбу добавляют исходные растворы N 1 - N 3 в количествах и последовательности, как указано в таблице А.1.
     
     Полученный раствор стерилизуют на водяной бане в течение 20 мин при температуре 75 °С - 80 °С и охлаждают, затем добавляют раствор N 4 (см. таблицу А.1).
     
     Если для приготовления питательной среды для культивирования водорослей используют искусственную морскую воду (см. 5.3.2), то ее допускается разбавлять дистиллированной водой до минерализации (солености), соответствующей минерализации (солености) анализируемой пробы.
     
     Питательную среду Гольдберга хранят в условиях, исключающих воздействие света при комнатной температуре не более одного года.

А.2 Приготовление питательной среды для метода Б

А.2.1 Приготовление исходных растворов

Исходные растворы N 1 - N 3 для приготовления питательной среды готовят в мерных колбах вместимостью 100 см, куда вносят реактивы в количествах, указанных в таблице А.2, и затем содержимое колб доводят до метки деионизированной водой (см. 5.2).


Таблица А.2

Номер исходного раствора

Состав раствора

Массовая концентрация реактива в исходном растворе, мг/дм

Массовая концентрация реактива в питательной среде по А.2.2, мкг/дм

1

Хлорид железа 6-водный по ГОСТ 4147 (FeCl·6HO)

48

149 (Fe)


Марганец хлористый 4-водный по ГОСТ 612 (MnCl·4HO)

144

605 (Mn)


Цинк сернокислый 7-водный по ГОСТ 4174 (ZnSO·5HO)

45

150 (Zn)


Медь (II) сернокислая 5-водная по ГОСТ 4165 (CuSO·5HO)

0,157

0,6 (Cu)


Кобальт хлористый 6-водный по ГОСТ 4525 (CoCl·6HO)

0,404

1,5 (Со)

2

Борная кислота по ГОСТ 9656 (HBO)

1140

3,0 (В)


Биотин

0,01

0,005


Витамин В (цианокобаламин)

0,10

0,05


Фосфорнокислый калий (KPO)

3,0 г/дм

3,0 мг/дм;
0,438 мг/дм Р

3

Азотнокислый натрий по ГОСТ 4168 (NaNO)

50,0 г/дм

50,0 мг/дм;
8,24 мг/дм N


Кремниевокислый натрий 5-водный (NaSiO·5HO)

14,9 г/дм

14,9 мг/дм;
1,97 мг/дм Si



Приготовленные исходные растворы фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,2 мкм. Исходные растворы N 1 и N 3 допускается стерилизовать в автоклаве при температуре 120 °С в течение 15 мин.

Исходные растворы хранят при температуре от 2 °С до 4 °С не более одного года.

А.2.2 Приготовление питательной среды

В мерную колбу вместимостью 1000 см вносят примерно 900 см природной (см. 5.2) или искусственной (см. 5.3.2) морской воды, добавляют исходные растворы (см. таблицу А.2) в следующей последовательности и количествах: 15 см раствора N 1; 0,5 см раствора N 2; 1,0 см раствора N 3, затем доводят содержимое колбы до метки той же морской водой.

При необходимости доводят рН питательной среды до значения (8,0±0,2) путем добавления 10%-ного раствора соляной кислоты или 10%-ного раствора гидроокиси натрия.

Примечание - При приготовлении питательной среды для Sceletonema costatum (Greville) Cleve используют только природную морскую воду.

А.2.3 Приготовление концентрированной питательной среды для разбавлений сточных вод

В мерную колбу вместимостью 1000 см вносят 700 см природной (см. 5.2) или искусственной (см. 5.3.2) морской воды, добавляют исходные растворы (см. таблицу А.2) в следующей последовательности и количествах: 135 см исходного раствора N 1; 4,5 см раствора N 2; 9 см раствора N 3, затем доводят содержимое колбы до метки той же морской водой.

Измеряют значение рН полученной концентрированной питательной среды и доводят до значения (8,0±0,2) путем добавления или 10%-ного раствора соляной кислоты, или 10%-ного раствора гидроокиси натрия.

Примечание - При подготовке анализируемой пробы сточной воды разбавлением исходной пробы сточной воды природной (см. 5.2) или искусственной (см. 5.3.2) морской водой рекомендуется использовать концентрированную питательную среду, так как при тестировании пробы необходимо обеспечить постоянство соотношений концентраций компонентов питательной среды для водорослей на уровне массовых концентраций реактивов, приведенных в таблице А.2.