ГОСТ Р 51128-98

Группа Н59

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ

Метод определения D-изолимонной кислоты

Fruit and vegetable juices. Method for determination of D-isocitric acid

ОКС 67.080*

ОКСТУ 9109

_______________

* В указателе "Национальные стандарты" 2005 г. и ИУС 9-2018 ОКС 67.160.20. Здесь и далее.

- Примечание изготовителя базы данных.

Дата введения 1998-07-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Московской государственной академией пищевых производств, Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности

ВНЕСЕН Техническим комитетом ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 19 января 1998 г. N 6

3 Разделы настоящего стандарта за исключением 2; 5; 6; 8,2; 9 представляют собой аутентичный текст европейского стандарта ЕН 1139-94*. "Фруктовые и овощные соки. Ферментативное определение содержания D-изолимонной кислоты. Спектрофотометрическое определение никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФН)"

_______________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей.     

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июль 2010 г.

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения D-изолимонной кислоты в виде свободной кислоты или ее соли, включая эфиры и лактоны.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2603-79 Реактивы. Ацетон. Технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 3760-79 Реактивы. Аммиак водный. Технические условия

ГОСТ 4108-72 Реактивы. Барий хлорид 2-водный. Технические условия

ГОСТ 4166-76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 6259-75 Реактивы. Глицерин. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 10652-73 Реактивы. Соль динатриевая этилендиамин-N, N, N', N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (Трилон Б). Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб

ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

     3 Определения и сокращения

3.1 В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:

массовая концентрация D-изолимонной кислоты во фруктовых и овощных соках, нектарах и сокосодержащих напитках: Массовая концентрация D-изолимонной кислоты, определенная в соответствии с методикой, установленной настоящим стандартом, выраженная в мг/дм.

3.2 В настоящем стандарте применяют следующие сокращения:

ИЦДГ - изоцитратдегидрогеназа ЕС 1.1.1.42 [1];

НАДФ - никотинамидадениндинуклеотидфосфат, окисленная форма;

НАДФН - никотинамидадениндинуклеотидфосфат, восстановленная форма;

Е - стандартная единица, определяет количество (активность) фермента, которое служит катализатором при 25 °С для превращения 1 мкмоля вещества в минуту.

     4 Сущность метода

Метод основан на осаждении D-изолимонной кислоты в виде соли бария, перерастворении соли, ферментативном декарбоксилировании иона цитрата под действием НАДФ в присутствии ИЦДГ, фотометрическом измерении количества образовавшегося НАДФН, эквивалентного количеству D-изолимонной кислоты.

В ходе анализа протекают следующие ферментативные реакции:     

.    (1)

     5 Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

Спектрофотометр, позволяющий проводить исследования при длине волны 340 нм, или фотометр фотоэлектрический шириной спектральной полосы не более 10 нм и допустимой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1%, или спектрофотометр на ртутной лампе, позволяющий проводить измерения при длинах волн 365 или 334 нм.

Кюветы из оптического стекла или полистироловые рабочей длиной 10 мм.

Иономер или pH-метр с погрешностью измерения не более 0,05 pH.

Электрод для измерения pH стеклянный.

Электрод сравнения (каломельный).

Пипетки по ГОСТ 29227 типа 3, исполнения 1, 1-го класса точности, вместимостью 1 и 10 см.

Дозаторы пипеточные объемами 1, 0,2 и 0,02 см относительной погрешностью дозирования ±1% [2]*.

_______________

* См. раздел Библиография. - Примечание изготовителя базы данных.

Колба мерная по ГОСТ 1770, исполнения 2, вместимостью 50 см.

Центрифуга лабораторная, обеспечивающая увеличение ускорения свободного падения при центрифугировании в 3000 раз.

Стаканы для центрифугирования вместимостью 100 см.

Фильтры бумажные обеззоленные марки ФОМ по ГОСТ 12026.

Баня водяная [3]*.

_______________

* См. раздел Библиография. - Примечание изготовителя базы данных.

Кислота D-изолимонная по НД [4] раствор массовой концентрации ()=500 мг/дм.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч., раствор молярной концентрации ()=4 моль/дм.

Аммиак водный по ГОСТ 3760, ч.д.а.

Ацетон по ГОСТ 2603, ч.д.а.

Барий хлористый 2-водный по ГОСТ 4108, х.ч, раствор массовой концентрации ()=300·10 мг/дм.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, ч.д.а., раствор молярной концентрации ()=4 моль/дм.

Натрий сернокислый по ГОСТ 4166, ч.д.а., раствор массовой концентрации ()=71·10 мг/дм.

Марганец (II) сернокислый [5]*, раствор массовой концентрации ()=12,5·10 мг/дм.

Этилендиаминтетрауксусной кислоты динатриевая соль 2-водная по ГОСТ 10652, ч.д.а.

Трис(гидроксиметил)аминометан [6]*, х.ч.

_______________

* См. раздел Библиография. - Примечание изготовителя базы данных.

Глицерин по ГОСТ 6259.

НАДФ (динатриевая соль) по [4].

ИЦДГ [4].

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применять другие средства измерений с метрологическими характеристиками, вспомогательные устройства с техническими характеристиками, а также реактивы по качеству не ниже перечисленных.

     6 Отбор и подготовка проб

Отбор проб - по ГОСТ 26313, подготовка их к испытанию - по ГОСТ 26671.

6.1 Выделение D-изолимонной кислоты из фруктового и овощного сока, нектаров и сокосодержащих напитков

В стакане для центрифугирования 10 см исследуемого образца смешивают с 5 см раствора гидроокиси натрия. Раствор выдерживают в течение 10 мин при температуре от 20 °С до 25 °С. После добавления 5 см соляной кислоты объем раствора доводят водой до 25 см. Последовательно приливают 2 см раствора аммиака, 3 см раствора хлористого бария и 20 см ацетона и хорошо перемешивают стеклянной палочкой. Раствор выдерживают в течение 10 мин, затем в течение 5 мин центрифугируют. Надосадочную жидкость осторожно декантируют, осадок в стакане для центрифугирования растворяют в 20 см раствора сернокислого натрия, помешивая стеклянной палочкой. Для ускорения растворения осадка стакан помещают на кипящую водяную баню и выдерживают в течение 10 мин при неоднократном перемешивании. После охлаждения до температуры от 20 °С до 25 °С раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см и доводят буферным раствором до метки. Из мерной колбы раствор переносят в колбу Эрленмайера, содержащую 1 г активированного угля, выдерживают в течение 5 мин и фильтруют через складчатый бумажный фильтр. Прозрачный, бесцветный фильтрат используют для ферментативного определения D-изолимонной кислоты.