Статус документа
Статус документа

ГОСТ 9.048-89 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Изделия технические. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов

ПРИЛОЖЕНИЕ 4
Обязательное

     
ВЫРАЩИВАНИЕ, ПЕРЕСЕВ И ХРАНЕНИЕ КУЛЬТУР ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ

      
1. Получение чистых культур плесневых грибов


Чистые культуры плесневых грибов получают один раз в 3 года в институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР. При выборе штаммов руководствуются "Каталогом культур микроорганизмов, поддерживаемых в учреждениях СССР".

2. Выращивание и пересев культур грибов

2.1. Культуры грибов, полученные в запаянных ампулах, восстанавливают согласно прилагаемой инструкции и определяют сохранение их морфолого-культуральные признаки.

2.2. Восстановленные культуры грибов пересевают в пробирки со скошенной питательной средой с агаром. Количество партий должно быть не менее двух. Одна партия является музейной и используется для длительного хранения чистых культур грибов (далее - музейная). Другая партия является исходной для получения рабочих партий культур грибов (далее - исходная).

2.3. Количество исходных и рабочих партий зависит от объема испытаний.

2.4. Исходная партия культур грибов обновляется один раз в 3 меc.

2.5. Рабочие партии культур грибов выращивают за 14 сут до начала испытаний и используют для получения споровой суспензии грибов.

2.6. Культуры грибов пересевают в пробирки на скошенную твердую питательную среду в пылезащитном боксе, предварительно продезинфицированном (п.5.3.5).

2.7. На пробирках обозначают виды грибов и дату пересева, которую заносят в журнал регистрации пересева культур грибов.

2.8. Культуры грибов пересевают в пробирки при помощи бактериологической петли, прокаленной над пламенем спиртовой горелки. Петлю изготовляют из проволоки (платиновой, хромовой, никелевой, молибденовой) диаметром (0,6) мм, длиной (120) мм. Проволоку укрепляют в стеклянном или металлическом держателе.

2.9. Пробирки, засеянные спорами грибов, помещают в термостат при температуре (29±2) °С на 10-14 сут до появления зрелого спороношения.

2.10. Культуры грибов проверяют на соответствие пересеянному виду и чистоту.

3. Хранение культур грибов методом периодических пересевов

3.1. Музейную партию культур грибов хранят в пробирках на скошенной питательной среде с агаром и пересевают один раз в 6 мес.

Не допускается более семи последовательных пересевов этой партии в течение 3 лет.

3.2. Пробирки с чистыми культурами грибов хранят в холодильнике при температуре (7±3) °С.

4. Хранение культур грибов в стерильной почве

4.1. Для хранения музейной партии грибов используют стерильную садовую плодородную почву.

4.2. Почву просеивают через сито, рассыпают по пробиркам по 5 г и стерилизуют в автоклаве при давлении 100 кПа по 30 мин в течение 3 сут. После автоклавирования пробирки с почвой подсушивают при комнатной температуре в течение 2-3 сут.

4.3. Культуры грибов выращивают на скошенной поверхности среды Чапека-Докса с агаром и с помощью бактериологической петли переносят в пробирки со стерильной почвой.

4.4. Ватные пробки обрезают вровень с краями пробирки и заливают парафином.

4.5. Культуры грибов в стерильной почве хранят в холодильнике при температуре (7±3) °С или при комнатной температуре в течение 3 лет без пересева.