Приложение Б
(справочное)
Б.1 Определение количества сульфатредуцирующих бактерий
Стерильную питательную среду Постгейта В, приготовленную по приложению В, разливают стерильной градуированной пипеткой по 18 см
в стерильные сухие бактериологические пробирки. Объем бактериологических пробирок 20 (±2) см. Объем среды - до заполнения пробирки 1-2 см. На каждой пробирке пишут порядковый номер, отвечающий номеру разведения, начиная с цифры 2. Первое разведение получают в колбе с 10 навеской грунта и 90 см стерильной водопроводной воды (1:10). Потом переносят стерильной пипеткой 2 см грунтовой суспензии из колбы в первую пробирку с 18 см среды. Получают второе разведение - 1:100. Суспензию из этого разведения тщательно перемешивают, закрыв пробирку стерильной резиновой пробкой. Далее другой стерильной пипеткой отбирают 2 см полученного разведения и переносят в следующую пробирку, получая третье разведение - 1:1000. Аналогичным способом далее готовят последующие разведения. Степень разведения определяют, исходя из количества бактерий в пробе грунта и, соответственно, число разведений тем больше, чем больше бактерий в исследуемом грунте. Во все пробирки после получения разведений добавляют стерильную питательную среду для вытеснения воздуха из пробирки и герметично закрывают стерильными резиновыми пробками. Пробирки устанавливают в штатив, который помещают в термостат при температуре (28±2)°С и инкубируют не менее 20 суток. Параллельно с посеянными пробирками в термостат ставят пробирки со стерильной питательной средой (контроль среды).
Б.2 Определение количества автотрофных ацидофобных тионовых бактерий
Стерильную питательную среду Бейеринка согласно приложению В разливают стерильной пипеткой по 13,5 см в стерильные сухие бактериологические пробирки. Затем переносят стерильной пипеткой 1,5 см почвенной суспензии в первую пробирку с 15 см питательной среды. Получают второе разведение - 1:100. Полученную суспензию тщательно перемешивают с помощью другой стерильной пипетки, набирая в пипетку и выпуская из нее полученную суспензию. Эту процедуру повторяют трижды, что обеспечивает перемешивание суспензии и уменьшает адсорбцию клеток на стенках пипетки. Затем этой же пипеткой набирают 1,5 см полученного разведения и переносят его в другую пробирку, получая третье разведение - 1:1000. Степень разведения обуславливается возможным количеством бактерий в пробе грунта. Контролем среды является пробирка со стерильной средой Бейеринка. Пробирки нумеруют, помещают в термостат при температуре (28±2)°С и выдерживают не более чем 7 суток.
Б.3 Обработка результатов
После инкубации пробирок в термостате наличие роста сульфатредуцирующих бактерий определяют визуально по почернению среды и наличию черного осадка вследствие образования сульфида железа.
Порядковый номер пробирки, в которой еще наблюдается рост бактерий, отвечает порядку численности бактерий в 1 см грунтовой суспензии.
Количество бактерий 
(клеток/г АСГ
) в 1 г грунта определяют по формуле
________________
В пересчете на абсолютно сухой грунт (АСГ).
, (Б.1)
где 
- коэффициент влажности;
- количество бактерий в 1 см исходной грунтовой суспензии.
Коэффициент влажности (
, %) рассчитывают по формуле
, (Б.2)
где 
- относительная влажность грунта, %.
Относительную влажность грунта определяют по ГОСТ 28268.
Б.4 Оформление результатов
Результаты посева и расчетов заносят в протокол, в котором указывают:
- место отбора образцов почв;
- глубина укладки подземного сооружения;
- погодные условия при отборе образцов почв;
- дата проведения отбора проб и проведения определений;
- визуальные наблюдения (окраска, запах);
