ГОСТ 34554-2019 Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Испытания по оценке репродуктивной токсичности двух поколений (с Поправкой)

     7 Гистопатологическое исследование

7.1 Животные, приносящие потомство

7.1.1 У животных, давших потомство (поколения Р и F1), фиксируют и хранят в соответствующей среде указанные ниже органы и ткани или их представительные образцы для последующего гистопатологического исследования:

- вагина, матка с шейкой матки и яичники (сохраняют в соответствующей фиксирующей смеси);

- одно яичко (сохраняют в фиксирующей смеси Буэна или аналогичной), один эпидидимис, семенные пузырьки, простату и коагулирующие железы;

- ранее установленные как органы-мишени из всех животных поколений Р и F1, выбранных для спаривания.

7.1.2 Полное гистологическое исследование зафиксированных органов и тканей, перечисленных в 7.1.1, следует проводить для животных, получавших высокие дозы исследуемого вещества, и контрольной группы поколений Р и F1, выбранных для спаривания. Обследование яичников животных поколения Р не обязательно. Для получения дополнительных данных для определения уровня отсутствия наблюдаемого вредного воздействия (NOAFL) следует провести гистологическое исследование органов животных, получавших низкие и средние дозы исследуемого вещества. Дополнительно гистологическому исследованию должны быть подвергнуты органы репродуктивной системы животных из групп с низкими и средними дозами исследуемого вещества, у которых подозревают снижение фертильности, то есть животных, которые не смогли спариться, зачать или стать производителями, получить жизнеспособное потомство, или животных, у которых были обнаружены нарушения овариального цикла, числа сперматозоидов, их подвижность или морфология. Должны быть исследованы все физические повреждения органов, такие как атрофия или развитие опухолей.

7.1.3 Для определения признаков фертильной токсичности, таких как неразвитые сперматиды, отсутствие типов или слоев зародышевых клеток, наличие многоядерных гигантских клеток или присутствие сперматогенных клеток в полости, должно быть проведено тщательное гистологическое исследование (с использованием фиксирующей смеси Буэна, приготовлением препаратов в парафине и поперечных срезов толщиной 4-5 мкм) [15]. Изучение неповрежденного эпидидимиса должно включать оценку продольного сечения головки, тела и хвоста. Эпидидимис следует изучить на наличие инфильтрации лейкоцитами, изменения в распространенности типов клеток, наличие клеток аберрантного типа и фагоцитоза сперматозоидов. Для исследования мужских половых органов можно использовать метод окрашивания PAS и гематоксилином.

7.1.4 Яичники после периода лактации должны содержать примордиальные и растущие фолликулы, а также большое желтое тело лактации. При гистологическом исследовании следует оценить качественное уменьшение популяции примордиальных фолликулов. Количественный подсчет примордиальных фолликулов должен быть проведен для самок поколения F1; количество животных, выбор секции яичника и выбор количества секций должны быть статистически обоснованы с учетом используемой процедуры оценки. Исследование должно включать подсчет количества примордиальных фолликулов, которое может быть скомбинировано с небольшими растущими фолликулами для сравнения яичников животных контрольной и подопытных групп [16]-[20].

7.2 Потомство после окончания грудного вскармливания (отъемыши)

Фиксируют и хранят в подходящей среде для гистологического исследования ткани с видимой патологией и органы-мишени всех потомков/полов/пометов всех групп поколений F1 и F2, не отобранных для спаривания (см. 6.6.1), у которых были обнаружены внешние дефекты или клинические симптомы. Должно быть проведено полное гистопатологическое исследование зафиксированных тканей, особое внимание обращают на органы репродуктивной системы.