ГОСТ EN 15791-2015 Корма. Определение дезоксиниваленола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с очисткой на иммуноаффинной колонке (Переиздание)

     6 Методика проведения испытания

6.1 Подготовка пробы

Важно, чтобы лаборатория получала пробу, которая действительно является представительной и не была повреждена или заменена во время транспортирования или хранения. Пробы отбирают и подготавливают в установленном порядке ([2]). Пробы тонко измельчают и тщательно перемешивают, используя измельчитель (5.5) и барабанный смеситель (5.6) или применяя другой процесс, в отношении которого было доказано, что он обеспечивает полную гомогенизацию до того, как будет отобрана навеска для анализа.

Во всех случаях, если проба заморожена, ей дают полностью разморозиться до отбора навески. Пробу тщательно перемешивают до отбора.

6.2 Экстракция

Взвешивают 25 г подготовленной пробы в колбу с резьбовой крышкой вместимостью 250 или 500 см (5.7). Добавляют 200 мл деионизированной воды, завинчивают крышку и встряхивают (5.3) в течение 1 ч.

Готовят воронку (5.8) с фильтром (5.9). Фильтруют экстрагированную пробу в чистую колбу с резьбовой крышкой вместимостью 250 или 500 см (5.7).

6.3 Очистка на иммуноаффинной колонке

Присоединяют емкость (5.16) к иммуноаффинной колонке. Добавляют 8 см деионизированной воды. Затем переносят 2,0 см отфильтрованного экстракта (см. выше; 0,5 мл в случае аналитических результатов более 4000 мкг/кг; см. раздел 8) в емкость (5.16). Дают экстракту самостоятельно полностью протечь через иммуноаффинную колонку со скоростью 1-2 капли в секунду. Когда экстракт полностью протечет через иммуноаффинную колонку, через колонку пропускают 5 см деионизированной воды. Удаляют остаточную жидкость, пропуская через колонку азот или воздух в течение примерно 5 с. Выливают все элюаты данного этапа очистки.

Помещают виалу для автодозатора ВЭЖХ (5.17) под колонку и пропускают самотеком 0,5 мл метанола (4.3) через колонку, собирая элюат. После того как последние капли метанола пройдут через колонку, оставляют метанол в колонке примерно на 1 мин. Затем добавляют еще 1,0 мл метанола (4.3) и продолжают собирать элюат. Осторожно пропускают азот или воздух через колонку, чтобы собрать весь остаточный элюат.

Примечание - В качестве альтернативы процедуре очистки на иммуноаффинной колонке, проводимой вручную (6.3), элюирование можно выполнить, используя устройство автоматической подготовки пробы при условии, что объемы и скорости потока останутся неизменными.

6.4 Приготовление аналитического раствора

Помещают виалу с элюатом в испаритель (5.19) и осторожно выпаривают досуха под воздействием азота или воздуха при температуре примерно 50°C. Сразу после этого охлаждают виалу ВЭЖХ до комнатной температуры и разбавляют остаток 0,50 см подвижной фазы (4.5). Хорошо перемешивают при помощи вихревого миксера (5.4) в течение не менее 30 с, чтобы остаток снова полностью растворился. Если аналитический раствор мутный, тогда его фильтруют через шприцевой фильтр (5.18).

6.5 Процедура обогащения

Для того чтобы определить степень извлечения, обогащают материал без дезоксиниваленола обогащающим раствором (4.8). Уровень обогащения должен находиться в пределах диапазона градуировки (желательно средний диапазон). Оставляют обогащенную пробу не менее чем на 30 мин, чтобы испарился растворитель.