ГОСТ EN 15791-2015 Корма. Определение дезоксиниваленола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с очисткой на иммуноаффинной колонке (Переиздание)

     4 Реактивы

Для проведения анализа, если не указано иное, используют только реактивы признанной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696. Качество растворителей должно соответствовать требованиям растворителей для ВЭЖХ.

4.1 Ацетонитрил

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Ацетонитрил опасен, поэтому работать с ним необходимо в вытяжном шкафу. Необходимо использовать средства индивидуальной защиты (лабораторный халат, очки, перчатки).

4.2 Дезоксиниваленол (ДОН), чистотой не менее 97%

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Дезоксиниваленол высокотоксичен. Все время необходимо носить перчатки и очки, а все работы по подготовке пробы и стандартного образца необходимо выполнять в вытяжном шкафу.

4.3 Метанол

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Метанол опасен, поэтому работать с ним необходимо в вытяжном шкафу. Необходимо использовать средства индивидуальной защиты (лабораторный халат, очки, перчатки).

4.4 Ледяная уксусная кислота

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Ледяная уксусная кислота опасна, поэтому работать с ней необходимо в вытяжном шкафу. Необходимо носить соответствующие средства защиты (лабораторный халат, очки, перчатки).

4.5 Подвижная фаза

Смешивают 15 объемных частей метанола (4.3) с 84,9 объемной части воды и 0,1 объемной части ледяной уксусной кислоты (4.4). Точное количество используемого метанола и необходимость использования уксусной кислоты зависят от выбранной для анализа ВЭЖХ колонки. При необходимости регулируют количество метанола. Дегазируют раствор перед его применением.

4.6 Промывной растворитель

Смешивают 50 объемных частей метанола (4.3) с 50 объемными частями воды.

4.7 Исходный раствор ДОН

Раствор содержит 250 мкг дезоксиниваленола на 1 см ацетонитрила.

Раствор можно приготовить следующим образом: добавляют 4,0 мл ацетонитрила (4,1) в 5 мг ДОН (4.2) для получения раствора с концентрацией 1,25 мг/см. Разбавляют 1000 мкл раствора с концентрацией 1,25 мг/см до 5 см ацетонитрилом для получения исходного раствора с концентрацией 250 мкг/см. Разбавляют 200 мкл исходного раствора с концентрацией 250 мкг/см в мерной колбе вместимостью 2,0 см (5.11) ацетонитрилом, чтобы получить разбавленный исходный раствор с концентрацией 25 мкг/см.

Для того чтобы определить точную концентрацию, измеряют значения оптической плотности данного разбавленного исходного раствора с концентрацией 25 мкг/см при помощи спектрофотометра (5.15) в диапазоне 200-270 нм в кварцевой кювете с оптической длиной пути 1 см, а в качестве эталона используют ацетонитрил (4.1). Измеряют оптическую плотность при 220 нм. Рассчитывают массовую концентрацию дезоксиниваленола , мкг/см, по формуле

,                                        (1)

где А - оптическая плотность, измеренная при максимальном значении на кривой оптической плотности (220 нм);

М - молярная масса дезоксиниваленола (M=296,3 г/моль);

k - молярный коэффициент поглощения дезоксиниваленола в ацетонитриле (4.1), (681,0±12,6) м/моль) ([1]);

d - оптическая длина пути кварцевой кюветы, см (1 см).

Рассчитывают точную концентрацию исходного раствора с концентрацией 250 мкг/мл по следующей формуле

.                               (2)

Исходный раствор хранят в темном месте не более 3 мес при температуре 4°C-8°C или не более 6 мес при температуре ниже минус 18°C.

Примечание - Приготовление исходного раствора можно выполнять гравиметрически, при этом точно взвешивают стандартный образец ДОН и растворитель, используемый для его растворения.