ГОСТ ISO 5553-2013 Мясо и мясные продукты. Обнаружение полифосфатов (Переиздание)

     8 Проведение определения

8.1 Приготовление тонкослойных пластин

Растворяют 0,3 г крахмала (см. 5.5) в 90 см кипящей воды. Охлаждают, добавляют 15 г порошка клетчатки (см. 5.4) и гомогенизируют в лабораторном миксере (см. 6.3) в течение 1 мин.

Суспензию наносят на стеклянные пластины (см. 6.1) при помощи прибора для равномерного распределения (см. 6.2), приспособленного для получения слоя толщиной 0,25 мм.

Сушат пластины на воздухе в покое в течение 60 мин при комнатной температуре и нагревают их окончательно в течение 10 мин при температуре 100°С.

Хранят пластины в эксикаторе (см. 6.4).

Также возможно использование готовых пластин (см. 6.2).

8.2 Приготовление испытуемой пробы

Гомогенизируют пробу, пропустив ее не менее двух раз через мясорубку (см. 6.5), помешивая. Хранят пробу в заполненном доверху герметичном закрытом контейнере и по необходимости в холодильнике. Анализируют пробу сразу, но не позднее чем в течение 5 ч.

8.3 Приготовление сыворотки

8.3.1 Размачивают 50 г анализируемой пробы (см. 8.2) в 15 см воды при температуре от 40°С до 60°С в химическом стакане, используя лопатку или стержень для размешивания, в течение 5 (не более пяти) мин до получения однородной массы.

8.3.2 Добавляют 10 г трихлоруксусной кислоты (см. 5.1) и вновь тщательно размешивают.

8.3.3 Немедленно помещают в холодильник на 1 ч и затем собирают отделившуюся сыворотку, сливая через гофрированную фильтровальную бумагу (см. 6.6).

8.3.4 Если фильтрат мутный, встряхивают один раз с равным объемом диэтилового эфира (см. 5.2). Удаляют слой эфира небольшой пипеткой и добавляют равный объем этанола (см. 5.3) к водной фазе. Встряхивают в течение 1 мин. Отстаивают смесь в течение нескольких минут и фильтруют через гофрированную фильтровальную бумагу (см. 6.6).

8.4 Хроматографическое разделение

8.4.1 Наливают проявляющий разбавитель (см. 5.7) в проявляющую емкость (см. 6.8) высотой от 5 до 10 мм и закрывают емкость крышкой. Отстаивают в течение 30 мин при температуре окружающей среды в защищенном от солнечного света и сквозняка месте.

8.4.2 Наносят 3 мм сыворотки или 6 мм, если выполнялась процедура очистки согласно 8.3.4, на слой клетчатки (см. 8.1) по линии, проведенной карандашом на расстоянии 2 см от дна. Пятна наносят небольшие, по 1 мм.

Для сушки используют теплый поток воздуха от фена (см. 6.9).

Примечание - Следует избегать попадания горячего воздуха во избежание опасности гидролиза фосфатов.

8.4.3 Таким же образом наносят 3 мм эталонной смеси (см. 5.6) на пластину на расстоянии от 1 до 1,5 см от места пробы, но точно на таком же расстоянии от дна.

8.4.4 Снимают крышку с емкости и быстро, но осторожно, помещают пластину с клетчаткой в емкость. Сразу закрывают крышкой. Проявляют пластину при температуре окружающей среды в защищенном от солнечного света и сквозняка месте.

8.4.5 Продолжают проявление до момента поднятия верхней части растворителя от линии, проведенной карандашом, приблизительно на 10 см. Вынимают пластину из емкости и сушат в течение 10 мин в сушильном шкафу (см. 6.11) при 60°С или в потоке холодного воздуха.

8.5 Выявление фосфатов

8.5.1 Пластину размещают вертикально под вытяжной трубой и равномерно опыляют пластину реагентом-распылителем (см. 5.8).

Желтые пятна проявляются сразу же.

8.5.2 Пластины сушат в потоке теплого воздуха от фена (см. 6.9). Постепенно нагревают в печи в течение 1 ч при 100°С для удаления последних следов азотной кислоты. Удаляют пластину из печи и проверяют отсутствие резкого запаха азотной кислоты.

8.5.3 Охлаждают пластину до комнатной температуры и затем помещают ее в вытяжной шкаф. Пластину равномерно покрывают реактивом для распыления II (см. 5.9).

Сразу появляются голубые пятна.

Примечание - Распыление реагентом II не является абсолютно необходимым. Тем не менее насыщенные голубые пятна, полученные этим реактивом, значительно улучшают обнаружение.