ГОСТ EN 15850-2013 Продукты пищевые. Определение зеараленона в продуктах для детского питания на кукурузной основе, ячменной, кукурузной и пшеничной муке, поленте и продуктах на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта и флуориметрическим детектированием

     7 Анализ с помощью ВЭЖХ

7.1 Условия хроматографического анализа

Приведенные ниже параметры обеспечивают удовлетворительное качество хроматографического анализа при использовании колонки по 5.24.3 и подвижных фаз по 4.16 или 4.20 (см. хроматограммы на рисунке А.1 и рисунке А.2, приложение А):

- скорость подачи подвижной фазы от 0,7 до 1,0 см/мин;

- длина волны возбуждения флуориметрического детектора от 274 до 275 нм;

- длина волны эмиссии флуориметрического детектора от 440 до 450 нм;

- объем инжекции: от 100 до 300 мм.

7.2 Приготовление градуировочных растворов

Готовят пять градуировочных растворов, для чего в мерные колбы вместимостью 10 см пипеткой по 5.15 или микрошприцем по 5.16 вносят стандартные растворы зеараленона в объемах, указанных в таблице 1 и 2, в зависимости от вида пробы. Объем содержимого в каждой колбе доводят до метки подходящим дилюентом (дилюент А по 4.15 для приготовления растворов по таблице 1 и дилюент В по 4.19 для приготовления растворов по таблице 2).

Таблица 1 - Приготовление градуировочных растворов при испытании ячменной, кукурузной и пшеничной муки, поленты и продуктов для детского питания на кукурузной основе

Таблица 2 - Приготовление градуировочных растворов при испытании продуктов на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста

При приготовлении градуировочных растворов допускается использовать как пипетки, так и другие подходящие стеклянные градуированные средства измерения объема.

7.3 Построение градуировочного графика

Градуировку осуществляют ежедневно перед проведением испытаний, для чего проводят хроматографический анализ градуировочных растворов, приготовленных в соответствии с таблицей 1 или 2. При построении градуировочного графика в системе координат откладывают значения массовой концентрации зеараленона, нг/см, против соответствующих величин аналитического сигнала в виде площади или высоты пика зеараленона. Полученный график проверяют на соответствие требованиям линейности с помощью регрессионного анализа (0,998).

7.4 Определение зеараленона в растворе пробы

Проводят хроматографический анализ растворов проб, приготовленных по 6.3.1 или 6.3.2, при тех же условиях, что были использованы при анализе градуировочных растворов.

7.5 Идентификация пиков

Пик зеараленона на хроматограмме раствора анализируемой пробы идентифицируют по совпадению его времени удерживания с временем удерживания пика зеараленона на хроматограммах градуировочных растворов. Необходимо, чтобы массовая концентрация зеараленона в анализируемом растворе пробы находилась в границах диапазона градуировки. Если массовая концентрация зеараленона в растворе пробы превышает верхнюю границу диапазона градуировки, раствор пробы разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ и проводят его повторный хроматографический анализ. Разбавление раствора пробы учитывают во всех последующих расчетах.