ГОСТ Р 55482-2013 Мясо и мясные продукты. Метод определения содержания водорастворимых витаминов (Переиздание)

     7 Проведение измерений

7.1 Условия проведения хроматографического анализа подбирают в зависимости от вида применяемого жидкостного хроматографа и хроматографической колонки.

В качестве примера могут быть приведены следующие условия хроматографического определения водорастворимых витаминов, выполненные на жидкостном хроматографе с колонкой 5 мкм 4,6150 мм.

________________

В настоящем стандарте используется жидкостной хроматограф Dionex Ultimate 3000 с колонкой Acclaim PolarAdvantage II. Данная информация является рекомендуемой, приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не исключает возможность использования других средств измерений с аналогичными свойствами.

Подвижная фаза: буферный раствор калия фосфорнокислого однозамещенного (3,4 ед. рН), ацетонитрил, вода.

Перед введением пробы колонку кондиционируют 4 мин буферным раствором калия фосфорнокислого однозамещенного с рН 3,4 ед. рН в соотношении с водой 35:65.

0,02 см анализируемого раствора вводят в подготовленный к работе жидкостный хроматограф и записывают хроматограмму в следующих условиях.

Градиент: 16 мин ацетонитрил от 0% до 30%, дистиллированная вода от 65% до 35%, буферный раствор калия фосфорнокислого однозамещенного (3,4 ед. рН) 35%.

Скорость подачи элюента 1,0 см/мин.

Температура колонки 30°С.

Хроматограмму записывают по следующим длинам волн:

- 210 нм - для витамина , витамина , витамина , витамина H;

- 245 нм - для витамина C;

- 254 нм - для витамина , витамина , витамина .

7.2 Идентификацию пиков хроматограммы исследуемого раствора проводят сравнением с хроматограммой градуировочного раствора по двум параметрам: времени удерживания и спектральному отношению .

7.3 Если время удерживания и спектральные отношения пиков хроматограммы анализируемого раствора совпадают в пределах допускаемых отклонений ( 0,05, 3%) с временем удерживания и спектральными отношениями соответствующих им пиков хроматограммы градуировочного раствора, результат идентификации считают положительным.

7.4 Если спектральные отношения совпадают в пределах допускаемого отклонения, а разница времени удерживания пиков хроматограммы исследуемого раствора и хроматограммы градуировочного раствора больше допускаемого отклонения, проводят хроматографический анализ соответствующего градуировочного раствора по 7.1 и сравнивают время удерживания. В случае совпадения в дальнейшем используют новую хроматограмму в качестве образца.

В случае повторного несовпадения времени удерживания используют метод добавок, для чего в анализируемый раствор вносят определенный объем растворов витаминов с массовой концентрацией, сравнимой с массовой концентрацией "сомнительных" пиков, и анализируют по 7.1.

Если на хроматограмме пробы с добавкой площади "сомнительных" пиков увеличились на величину, соответствующую величине добавки, эти пики относятся к определяемым компонентам.

Если на хроматограмме пробы с добавкой наряду с "сомнительными" пиками присутствуют пики, время удерживания и спектральные отношения которых совпадают с соответствующими параметрами добавленных компонентов, сомнительные пики не относятся к определяемым компонентам.

7.5 Если время удерживания соответствующих пиков хроматограммы анализируемого раствора и хроматограммы градуировочного раствора совпадают в пределах допускаемого отклонения, а разница спектральных отношений больше допускаемого отклонения, настоящий метод неприменим к данному образцу.

7.6 Массовая концентрация витаминов в анализируемом растворе не должна превышать предельных значений градуировочных растворов. В случае превышения анализируемый раствор, содержащий витамины, с помощью механического дозатора разбавляют в рассчитанное количество раз и проводят хроматографический анализ разбавленных растворов. Если массовая концентрация витаминов в анализируемом растворе ниже предельного значения градуировочного раствора, то необходимо увеличить массу продукта, используемого при подготовке пробы.