8.1 Приготовление растворов
8.1.1 Исходные растворы стандартов
8.1.1.1 Для приготовления исходного раствора витамина в мерную колбу объемом 100 см помещают около 100 мг витамина , растворяют в этиловом ректификованном спирте и доводят до метки спиртом. Этот раствор содержит около 1 мг/см витамина . Массовую концентрацию исходного раствора витамина уточняют по 8.1.2.1.
8.1.1.2 Для приготовления исходного раствора витамина в мерную колбу объемом 100 см помещают около 100 мг витамина , растворяют в этиловом ректификованном спирте и доводят до метки спиртом. Этот раствор содержит около 1 мг/см витамина . Массовую концентрацию исходного раствора витамина уточняют по 8.1.2.2.
Приготовленные растворы хранят в темноте при температуре не выше 4°С.
8.1.2 Рабочие растворы стандартов
8.1.2.1 1 см исходного раствора витамина , приготовленного по 8.1.1.1, с помощью пипетки переносят в мерную колбу объемом 100 см и доводят до метки этиловым ректификованным спиртом. Раствор готовят непосредственно перед проведением анализа. Массовая концентрация рабочего раствора витамина составляет 10 мкг/см.
Измерение оптической плотности стандартного раствора витамина проводят в кварцевой кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см при 265 нм, используя в качестве раствора сравнения спирт этиловый ректификованный. Для расчета массовой концентрации раствора витамина (, мкг/см) используют уравнение:
, (1)
где - значение оптической плотности рабочего раствора витамина при 265 нм;
- значение оптической плотности раствора витамина массовой концентрации 1 г в 100 см при 265 нм в спирте этиловом при толщине поглощающего слоя 1 см ();
- коэффициент пересчета граммов в микрограммы;
- коэффициент пересчета на 1 см.
8.1.2.2 1 см исходного раствора витамина , приготовленного по 8.1.1.2, с помощью пипетки переносят в мерную колбу объемом 100 см и доводят до метки спиртом этиловым ректификованным. Раствор готовят непосредственно перед проведением анализа. Массовая концентрация рабочего раствора витамина составляет 10 мкг/см.
Измерение оптической плотности стандартного раствора витамина проводят в кварцевой кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см при 265 нм, используя в качестве раствора сравнения спирт этиловый ректификованный. Для расчета массовой концентрации раствора витамина (, мкг/см) используют уравнение:
, (2)
где - значение оптической плотности рабочего раствора витамина при 265 нм;
- значение оптической плотности раствора витамина массовой концентрации 1 г в 100 см при 265 нм в спирте этиловом при толщине поглощающего слоя 1 см ();
- коэффициент пересчета граммов в микрограммы;
- коэффициент пересчета на 1 см.
8.1.2.3 Для приготовления рабочего раствора внутреннего стандарта витамина 10 см стандартного раствора витамина по 8.1.1.1 с помощью пипетки помещают в мерную колбу объемом 100 см и доводят до метки спиртом этиловым ректификованным. Раствор готовят непосредственно перед использованием. Массовая концентрация рабочего раствора витамина составляет 1 мкг/см.
8.1.2.4 Для приготовления рабочего раствора смеси витаминов и , необходимого для проведения полупрепаративной НФ ВЭЖХ, помещают 5 см рабочего раствора витамина по 8.1.2.1 и 5 см рабочего раствора витамина по 8.1.2.2 в колбу роторного испарителя. Растворитель тщательно упаривают на водяной бане при температуре не выше 40°С. Сухой остаток перерастворяют в 50 см н-гексана или подвижной фазы, используемой для проведения полупрепаративной НФ ВЭЖХ. Массовая концентрация витамина () в растворе составляет 1 мкг/см.
8.1.2.5 Из исходных растворов готовят не менее четырех рабочих растворов витамина в диапазоне концентраций 0,1-10,0 мкг/см, используемых для построения градуировочного графика по 8.4. Для этого 1,0 см и 10,0 см рабочего раствора витамина по 8.1.2.2 с помощью пипетки помещают в мерную колбу на 100 см и растворы доводят до метки спиртом этиловым абсолютным (массовая концентрация полученных растворов витамина составляет 0,1 мкг/см и 1,0 мкг/см), а также 0,5 см и 1,0 см исходного раствора витамина по 8.1.1.2 помещают в мерную колбу на 100 см и растворы доводят до метки спиртом этиловым абсолютным (массовая концентрация полученных растворов витамина составляет 5,0 мкг/см и 10,0 мкг/см).
8.2 Отбор и подготовка проб
8.2.1 Отбор проб проводят по ГОСТ 13496.0, ГОСТ 26809.1, ГОСТ Р 52062, ГОСТ Р 52179.
8.2.2 Крупные частицы средней пробы, выделенной методом квартования из лабораторной пробы, измельчают с использованием подходящего оборудования (например, лабораторной мельницы) до такого состояния, чтобы весь продукт проходил через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Размолотую пробу тщательно перемешивают.