ГОСТ Р 52995-2008 (ИСО 17129:2006) Молоко сухое. Определение содержания соевого и горохового белков с использованием капиллярного электрофореза в присутствии додецил сульфата (SDS-CE). Метод разделения
9 Методика испытания*
________________
* Слово "испытания" в наименование пункта 9 в бумажном оригинале выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.
9.1 Условия функционирования
9.1.1 Рабочие условия для капиллярного электрофореза (СЕ)
Капиллярную колонку (см. 5.9.1) сохраняют только для выполнения данной лабораторной процедуры. Новую колонку промывают водой. Перед каждой серией анализов использованный капилляр промывают раствором едкого натра в течение 0,5 мин, а затем промывают электрофорезным буфером в течение 0,5 мин.
Перед каждым разделением вновь промывают колонку, предпочтительно в обратном направлении, электрофорезным буфером при 241325 Па в течение 1 мин.
Миграции происходят при температуре 25 °С. Начинают электрофорез, когда прибор капиллярного электрофореза установлен на напряжение 2 кВ, затем следует линейный градиент напряжения от 2 до 7 кВ за 1,7 мин. Напряжение остается постоянным, равным 7 кВ, до истечения периода общего времени электрофореза 16 мин. Ток должен быть около 20 мкА, а прибор должен быть заземлен со стороны инжектора. Настраивают детектор на 14 нм, сбор данных при 2 Гц и время нарастания 0,5 с.
На основании характеристик прибора операторам следует адаптировать условия его функционирования для получения сравнимого качественного разделения.
9.1.2 Впрыскивание
Испытуемый раствор впрыскивают под давлением 3447,5 Па в течение 60 с. Затем погружают капилляр стороной впрыскивания в сосуд с водой на 6 с, а затем впрыскивают электрофорезный буфер из электрофорезного сосуда под давлением 3447,5 Па в течение 5 с. После этого этапа проводят миграцию.
Не разрешается использовать капилляр с буферами других типов. После использования капилляр промывают водой. Оба конца капилляра хранят в воде. В зависимости от разностей в давлении прибора меняют соответственно время промывки и время впрыскивания.
9.2 Пригодность тестирующего прибора
Три раза впрыскивают эталонную смесь для испытания. Проверяют согласованность времени миграции и площади пика белков из испытуемой смеси. Полученная разность должна быть менее 5% (относительная).
Новый капилляр может адсорбировать белки, что ведет к увеличению площадей пиков при повторных впрыскиваниях одного и того же образца испытания. Чтобы избежать этого, быстро смывают капилляр эталонным образцом в обычном направлении в течение 6 с. Затем промывают электрофорезным буфером в том же направлении.
Примечание - Отклонения электроферограмм могут быть вызваны:
- капилляром (включая плохо отрезанное отверстие капилляра);
- недостаточной температурной стабильностью капилляра (низким уровнем охлаждающей жидкости);
- повреждением дейтериевой лампы;
- другими неисправностями прибора.
9.3 Качественный анализ
9.3.1 Анализ раствора для испытания (см. 7.2) проводят при условиях функционирования (см. 8.1).
9.3.2 Идентификация пика
Идентификацию полученных пиков испытуемого образца проводят путем сравнения этих пиков с электроферограммами, которые показаны на рисунках А.1-А.3. Эти электрофореграммы показывают конфигурации пиков натурального сепарированного сухого молока и образцов, подмешанных соей и горохом в указанном порядке.
9.4 Количественный анализ
9.4.1 Анализ раствора для испытания контрольного образца (см. 8.4.2) и эталонных калибрующих образцов проводят при условиях функционирования (см. 8.1).
9.4.2 Контрольный образец
Впрыскивают буфер для образца под давлением 3447,5 Па на 50 с. Полученная основная линия должна быть относительно плоской.
9.4.3 Измерения
Для измерения используют следующую последовательность: