МУК 4.2.2217-07

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ, БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Выявление бактерий Legionella pneumophila в объектах окружающей среды

     
Дата введения 2007-08-01

1. Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Г.Ф.Лазикова, Ю.М.Федоров); ФГУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (И.В.Брагина, М.В.Зароченцев, Э.Ф.Опочинский); ГУ "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи" РАМН (И.С.Тартаковский, Т.И.Карпова, Ю.Е.Дронина, Ю.С.Аляпкина, Ю.М.Романова, А.Л.Гинцбург); ФГУЗ "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" (А.Н.Куличенко, С.А.Портенко, Н.А.Осина, В.В.Кутырев); ФГУЗ "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" (Ю.М.Ломов, А.Н.Терентьев, Г.Л.Карбышев, Л.И.Шелохович, Г.Д.Харабаджахян, И.К.Савельева); ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в г.Москве" (Н.Я.Салова); Управлением Роспотребнадзора по г.Москве (Л.В.Родина); ФГУЗ Причерноморская ПЧС (В.И.Малай, Н.Д.Темежникова); Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф.Эрисмана (Г.М.Трухина); ГУП "Мосводоканал" (Г.П.Кашкарова); МГУ инженерной экологии (А.Н.Цедилин, Е.М.Иванникова).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Роспотребнадзора (прот. N 1 от 29 марта 2007 г.).

3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Г.Г.Онищенко 30 мая 2007 г.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают методику проведения лабораторных исследований объектов окружающей среды по выявлению в них бактерий Legionella pneumophila - возбудителя болезни легионеров.

Проведение мониторинга объектов окружающей среды на наличие Legionella pneumophila позволит определить степень их контаминации возбудителем и дать оценку эффективности принимаемых мер в целях профилактики болезни легионеров и обеспечения безопасности здоровья населения.

1.2. Методические указания предназначены для применения в лабораториях учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Российской Федерации, осуществляющих контроль за объектами окружающей среды; в лабораториях других организаций, аккредитованных в установленном порядке на право осуществления контроля безопасности объектов окружающей среды на наличие возбудителя болезни легионеров.

1.3. Методические указания являются обязательными:

в порядке надзора за соблюдением установленных требований в области обеспечения безопасности объектов окружающей среды, в т.ч. в соответствии с СанПиН 2.1.2.1331-03 "Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды аквапарков", СанПиН 2.1.2.1188-03 "Плавательные бассейны. Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды. Контроль качества";

в ходе проведения противоэпидемических мероприятий и при эпидемиологическом расследовании возможных эпидемических вспышек и спорадических случаев болезни легионеров.

1.4. Предлагаемый метод выявления бактерий Legionella pneumophila в окружающей среде согласуется с международным стандартом ISO 11731 и руководством ВОЗ "Legionella and the prevention of legionellosis" (2006 г.).

2. Нормативные ссылки

2.1. Федеральный закон "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ.

2.2. Постановление Правительства Российской Федерации от 24 июля 2000 г. N 554 "Об утверждении Положения о государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации и Положения о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании".

2.3. СанПиН 2.1.2.1331-03 "Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды аквапарков".

2.4. СанПиН 2.1.2.1188-03 "Плавательные бассейны. Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды. Контроль качества".

2.5. МУК 4.2.1884-04 "Санитарно-микробиологический и санитарно-эпидемиологический анализ воды поверхностных вод".

2.6. Методические рекомендации МЗ СССР "Эпидемиология, клиника, лечение и профилактика легионеллеза", 1988.

2.7. Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтов".

2.8. Методические указания МУ 1.3.1888-04 "Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного патогенными биологическими агентами III-IV групп патогенности".

2.9. Методические указания МУ 3.5.5.1034-01 "Обеззараживание исследуемого материала, инфицированного бактериями I-IV групп патогенности, при работе методом ПЦР".

2.10. European Guidelines for Control and Prevention of Travel associated Legionnaires Disease, 2002.

2.11. ISO 1998.ISO 11731:1998 Water Quality-detection and enumeration of Legionella.

2.12. Legionella and the prevention of Legionellosis. - WHO guidelines. 2006.

3. Характеристика возбудителя болезни легионеров

Legionella pneumophila - грамотрицательная бактерия, возбудитель острых тяжелых пневмоний с высоким процентом летальных исходов (5-10%) и респираторных заболеваний. В природных условиях легионеллы обитают повсеместно в пресноводных водоемах, преимущественно в некультивируемой форме, и паразитируют в амебах и других простейших, не представляя серьезной опасности для человека. Размножение легионелл активно идет в теплой воде в диапазоне температур 25-45 °С, хотя их выделяют и из холодной воды.

Высокие адаптивные способности легионелл позволяют им успешно колонизировать искусственные водные системы - системы охлаждения и кондиционирования, градирни, компрессорные устройства, джакузи, фонтаны, медицинское оборудование и др. Условия для размножения легионелл в искусственных водных системах более благоприятны, чем в естественных, что приводит к накоплению в них возбудителя в высокой концентрации. Легионеллы активно колонизируют синтетические и резиновые поверхности промышленного, водопроводного, медицинского оборудования с образованием биопленок, в которых легионеллы значительно более устойчивы к действию дезинфицирующих веществ. В состав естественных биопленок помимо легионелл входят бактерии рода Pseudomonas, Klebsiella, Acinetobacter и др. Важная роль в персистенции легионелл в биопленках принадлежит амебам, в которых легионеллы активно размножаются перед образованием сложных биопленок в ассоциации с другими микроорганизмами.

Эпидемические вспышки и спорадические случаи болезни легионеров преимущественно выявляют в местах общественного назначения: у посетителей и персонала гостиниц; торговых, спортивных и выставочных комплексов; промышленных предприятий, больниц, учреждений; круизных судов и др. Фактором передачи служит водный мелкодисперсный аэрозоль, содержащий возбудителя и генерируемый системами водных коммуникаций.

Сочетание высокой концентрации легионелл в водной среде с источниками мелкодисперсного аэрозоля позволяет возбудителю инфекции вследствие ингаляции микробного аэрозоля попадать в нижнюю часть респираторного тракта и легкие человека, где происходит контакт с альвеолярными макрофагами, в которых вирулентные штаммы возбудителя активно размножаются.

При спорадическом легионеллезе и отдельных нозокомиальных вспышках заболевания возможна аспирация воды, контаминированной легионеллами без образования аэрозоля (бассейны, емкости для хранения и транспортирования воды и др.). Это обусловлено возрастанием восприимчивости к легионеллезу лиц со сниженной иммунологической реактивностью на фоне сопутствующих заболеваний, иммунодепрессивной терапии и др.

Эпидемические вспышки и спорадические случаи легионеллеза выявляют повсеместно. Особое значение в последние годы уделяется случаям болезни легионеров, возникающим во время поездок, путешествий и диагностируемым после возвращения из них. Инкубационный период составляет от 2 до 10 дней. Более 30% случаев спорадического легионеллеза, многочисленные эпидемические вспышки в гостиницах, на круизных судах послужили причиной создания международной системы эпидемиологического надзора за случаями легионеллеза, связанного с поездками.

В настоящее время известно около 50 видов легионелл, преимущественно выделенных из окружающей среды, из которых собственно болезнь легионеров вызывает вид Legionella pneumophila, насчитывающий 16 серогрупп. Причем более 80% случаев заболевания вызывают штаммы 1-й серогруппы. Среди других представителей рода Legionella в качестве микробов-оппортунистов, вызывающих заболевание при нарушении клеточного иммунитета и/или на коморбидном фоне, следует отметить L. micdadei, L. longbeachae, L. dumoffii и L. bozemanii. Остальные виды Legionella spp. не патогенны для человека.

4. Материально-техническое обеспечение*

_______________

* Указанное оборудование и расходные материалы могут быть заменены на аналогичные по характеристикам производства других фирм.

4.1. Средства измерения

рН метр - рН 410; диапазон рН от -1 до 14, точность 0,01 рН, температура анализируемой среды от -10 до 100 °С (Белоруссия)

Весы Adventurer - прецизионные одночашечковые электронные цифровые с функцией обнуления тары и другими вспомогательными функциями, стандартного уровня, максимальная загрузка - 210 г, погрешность при измерении - 0,001 г (OHAUS, США)

Весы ScoutPro - портативные одночашечковые электронные цифровые с функцией обнуления тары, максимальная нагрузка - 2000 г, погрешность при измерении - 0,1 г (OHAUS, США)

4.2. Оборудование

Шкаф сушильный стерилизационный ШСС-80П, поддерживающий температуру плюс (160±5) °С (Россия)

Термостат суховоздушный ТС-1/80, объем 80 л с температурой до 60 °С (Россия)

СО инкубатор МСО 5АС, персональный, объем 49 л, тепловая рубашка, ТС-датчик СО (Sanyo) или анаэростат GasPak 100 (на 11 чашек), GasPak 150 (на 36 чашек)

Стерилизатор паровой ВК-30 с вертикальной камерой, объем 150 л

Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды ГОСТ 6709-72

Облучатель бактерицидный настенный УФИК 1х30

Холодильник бытовой электрический с температурой в камере плюс 4-6 °С

Морозильная камера с температурой в камере до -20 °С

Водяная баня TW 2.03, автоматическое регулирование температуры до 85/90 °С, объем 8,5 л, внутренняя и внешняя циркуляция (Elmi, Латвия)

Батометр Молчанова ГР-18, предназначенный для взятия проб воды с различной глубины водоемов, с одновременным измерением температуры воды исследуемого слоя, при температуре окружающей среды от 1 до 40 °С (Россия)

Прибор для мембранной фильтрации под вакуумом с диаметром фильтрующей поверхности 35 или 47 мм и устройство для создания разрежения 0,5-1,0 атм. (САРТОГОСМ, Россия)

Прибор для подсчета колоний бактерий (Schuett)

Мешалка магнитная BioMMS-3000, без подогрева, максимальный объем 2 л, скорость вращения 0-3000 об./мин, размер платформы 150х150 мм

Универсальная центрифуга для пробирок до 50 мл "Ева 21" с роторами 6х50 мл (угловая скорость - до 6000 об./мин), 12х15 мл (угловая скорость - до 6000 об./мин), 30х2 мл (угловая скорость - до 12000 об./мин) (Hettich-Zentrifugen, Германия)

Микроцентрифуга/встряхиватель ТЭТА 2 (Биоком, Россия)

Малогабаритная высокоскоростная лабораторная микроцентрифуга "МиниСпин", угловая скорость - до 13400 об./мин, 12х1,5 (2,0) мл (Ерpendorf, Германия)

Твердотельный термостат Термо 24-15 с диапазоном рабочих температур от 0 до 120 °С (Биоком, Россия)

Охладитель проб ОП-1 с диапазоном температур oт -4 до 30 °С (Биоком, Россия)

Амплификатор Терцик МС-2 (ДНК-Технология, Россия)

Амплификатор iCycler для проведения ПЦР с учетом результатов в режиме реального времени, оптический и реакционный модули, комплект фильтров iQ5 Optical System (BIORAD, США)

Источник тока Эльф-4 (ДНК-технология, Россия)

Камера для горизонтального электрофореза SE-2 (Хеликон, Россия)

Фотодокументирующая система GelDoc 2000 (BIORAD, США)

4.3. Вспомогательные изделия и расходные материалы