МУ 3.5.5.1034-01  

     
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

     
3.5.5. ДЕЗИНФЕКЦИОННЫЕ СРЕДСТВА И ТЕХНОЛОГИИ

Обеззараживание исследуемого материала, инфицированного
бактериями I-IV групп патогенности, при работе методом ПЦР

     
Дата введения 2001-10-01

1. РАЗРАБОТАНЫ Российским научно-исследовательским противочумным институтом "Микроб" (Куличенко А.Н., Касьян И.А., Гаранина С.Б., Майоров Н.В., Тучков И.В., Еремин С.А., Дроздов И.Г., Кутырев В.В.).

2. УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 23.05.01.

3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ

1. Область применения

В настоящих указаниях предложены способы обеззараживания материала, зараженного или подозрительного на зараженность бактериями I-IV групп патогенности, при проведении генодиагностических исследований методом ПЦР.

Указания предназначены для специалистов санитарно-гигиенических, лечебно-профилактических учреждений, генодиагностических центров и лабораторий, применяющих метод ПЦР для обнаружения ДНК возбудителей инфекционных заболеваний.

2. Введение

Внедрение в практику лабораторной диагностики инфекционных болезней полимеразной цепной реакции (ПЦР) должно быть обеспечено соответствующими методами подготовки проб, предусматривающими обеззараживание исследуемого материала.

Используемые обычно в практике табельные средства стерилизации (растворы формалина, хлорамина, перекиси водорода и др.) не могут быть применены при ПЦР-анализе вследствие повреждающего действия на ДНК или ингибирования реакции.

В существующих СП 1.2.011-94* "Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности" не предусмотрено выполнение современных генетических методов, в т.ч. полимеразной цепной реакции, которая в настоящее время широко используется для обнаружения различных микроорганизмов, включая и возбудителей опасных инфекций.

________________

* На территории Российской Федерации действуют СП 1.3.1285-03. Здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.     

В настоящих методических указаниях для работы с не образующими споры бактериями I-II групп патогенности предлагается обработка объектов мертиолятом натрия и затем лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом. При работе с возбудителем холеры может быть использован метод прогревания при 100 °С в течение 30 мин.

Для инактивации не образующих споры микроорганизмов III-IV групп патогенности может быть использован метод термической обработки при 100 °С в течение 30 мин или лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом.

Для обеззараживания материала, содержащего спорообразующие микроорганизмы в т.ч. Bacillus anthracis применяют методический подход, заключающийся в герминации спор с последующей обработкой пенициллином, прогреванием при 100 °С и обработкой лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом.

Разработанные способы инактивации приводят к полному обеззараживанию материала, не повреждают ДНК и не ингибируют ПЦР.

3. Нормативные ссылки

СП 1.2.011-94 "Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности" (М., 1994).

СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами" (М., 1999).

Инструкция по контролю специфической стерильности экспериментальных препаратов, приготовленных из культур чумного или холерного микробов (Саратов, 1982).

Временная фармакопейная статья (ВФС) 42-62-ВС-86 для диагностикума бруцеллезного жидкого для реакции агглютинации.

Методические указания "Современные методы микробиологической диагностики туберкулеза" (М., 1975).

Руководство по профилактике чумы (Саратов, 1992).