БЕСПЛАТНО проверьте актуальность своей документации
с «Кодекс/Техэксперт АССИСТЕНТ»


     МУК 4.1.2158-07

     

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы
и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения
методом иммуноферментного анализа

     

Дата введения: с момента утверждения



1. РАЗРАБОТАНЫ ГУ НИИ питания РАМН: Тутельян В.А. (руководитель), Хотимченко С.А., Шевелева С.А., Ефимочкина Н.Р., Барбер Н.В., Григорьев А.М.; ФГУЗ "Центр государственного санитарно-эпидемиологического надзора в г.Москве" (Иванова Л.И., Кругликова Т.А.)

2. РЕКОМЕНДОВАНЫ К УТВЕРЖДЕНИЮ Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Российской Федерации

3. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ 18 января 2007 г. Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко

4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают методы определения остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в пищевом сырье и пищевых продуктах животного происхождения (в мясе и мясопродуктах; в птице и птицепродуктах; в молоке и молочных продуктах) на основе твердофазного иммуноферментного анализа.

1.2. Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также могут быть использованы для проведения производственного контроля другими испытательными лабораториями, аккредитованных в порядке, установленном Правительством Российской Федерации. Методические указания не могут быть применены для арбитражных исследований.

2. Общие положения

2.1. Среди контаминантов продовольственного сырья и пищевых продуктов важное место занимают остатки антимикробных ветеринарных препаратов, используемых для лечения и профилактики инфекционных заболеваний животных и птицы, в том числе антибиотики тетрациклиновой группы и сульфаниламидные препараты. При их поступлении в организм человека могут возникать аллергические реакции, дисбиотические изменения микрофлоры кишечника, а также происходит формирование антибиотикоустойчивых форм микроорганизмов.

Для определения остаточных количеств антибиотиков в пищевых продуктах в настоящее время в основном применяют микробиологические методы, которые являются сравнительно простыми и дешевыми, однако, отличаются недостаточной специфичностью результатов.

2.2. Для скрининга пищевых продуктов на загрязненность антибактериальными препаратами, в том числе сульфаниламидами, целесообразно использовать методы иммунохимического анализа, обеспечивающие высокую специфичность и точность, при этом предпочтительнее применять методы твердофазного иммуноферментного анализа (далее - ИФА), которые являются высокочувствительными.

2.3. При определении методом ИФА в соответствии с настоящими Методическими указаниями антибиотиков тетрациклиновой группы предел обнаружения их составляет от 0,0015 мг/кг до 0,15 мг/кг в зависимости от вида продукта; для сульфаниламидных препаратов - от 0,002 мг/кг до 0,02 мг/кг в зависимости от вида продукта.

3. Отбор и подготовка проб

3.1. Отбор пищевых образцов для исследования осуществляется в соответствии с требованиями ГОСТ 7269-79 "Мясо", ГОСТ 7202.0-74 "Мясо птицы", ГОСТ 3622-68 "Молоко и молочные продукты".

3.2. Отобранные образцы продуктов герметично упаковывают в полиэтиленовые мешки, стеклянные банки с притертыми крышками, маркируют и нумеруют. Образцы доставляют в лабораторию для анализа сразу же после отбора проб. В случае необходимости допускается хранить при температуре 4±2 °С в течение времени не более срока годности пищевых продуктов или замораживать до температуры минус 10-12 °С и хранить не более 2 недель.

3.3. К исследованию скоропортящихся образцов следует приступать в день их доставки в лабораторию.

4. Определение антибиотиков тетрациклиновой группы

4.1. Принцип метода ИФА


Базовым принципом для количественного определения антибиотиков тетрациклиновой группы в пищевых продуктах является твердофазный конкурентный иммуноферментный анализ на полистироловых планшетах. Метод основан на конкуренции свободного антибиотика из исследуемых образцов и антибиотика, предварительно адсорбированного на твердой фазе (лунке планшета) в составе белкового конъюгата, за центры связывания специфичных к тетрациклинам антител во вносимом растворе. После отделения не связавшихся реагентов количество антител, прореагировавших с иммобилизованным антигеном, определяют с помощью вторичных антивидовых антител, меченных пероксидазой хрена*. Количество связавшегося с антителами конъюгата вторичных антител определяют с помощью субстрат - хромогенной смеси. При этом количество определяемого антибиотика, содержащегося в исследуемом образце, обратно пропорционально регистрируемой оптической плотности продукта ферментативной реакции.

________________

* Текст соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.



4.2. Аппаратура, материалы, реактивы

Перечень и характеристики оборудования и материалов

Нормативные документы, примечания

1

2

Фотометр планшетный вертикального сканирования, с фильтрами, соответствующими длине волны 450 нм

"Униплан", "Мультискан" или иного типа с теми же характеристиками

Дозаторы пипеточные автоматические с переменным объемом 0,02-0,2 см, 0,1-1 см одноканальные

"Ленпипет", "Термолабсистемс" или иные тех же объемов

Дозаторы пипеточные автоматические восьмиканальные с переменным объемом 0,05-0,3 см



Наконечники для автоматических пипеток объемом до 0,30 см и до 1,00 см однократного применения

По спецификации изготовителя

Анализатор потенциометрический, погрешность измерений рН ±0,01 или рН-м

ГОСТ 19881-74 или другие марки с аналогичными характеристиками

Весы аналитические 120 г / 0,001 мг

ГОСТ 24104-88Е***

Весы лабораторные общего назначения, 2 класса точности, до 200 г / 0,1 г

ГОСТ 24104-88Е***

Гомогенизатор лабораторный

Типа "Ультратюрракс", "Диакс" или аналогичные

Аквадистиллятор

В соответствии с ГОСТ 6709-72

Холодильник бытовой электрический

ГОСТ 16317-87

Стаканы химические и колбы мерные вместимостью 25, 50, 200 и 500 см

ГОСТ 1770-74

Пипетки градуированные, 2 класса точности 1, 2, 5, 10 см

ГОСТ 20292-74**** или аналогичные

Часы механические сигнальные

ГОСТ 3145-84

Центрифуга настольная с эффективностью не менее 4000 g

По ТУ 5.375-4261 или иного типа

Колонка для твердофазной экстракции RIDA С18 или аналогичная с такими же характеристиками

По спецификации изготовителя

Цилиндры мерные вместимостью 25 см

По спецификации изготовителя

Шейкер лабораторный для пробирок

Типа "Вортекс"

Микроиспаритель лабораторный одноканальный

Моделей ПЭ-2300, "Мини-Вап" или других аналогичного назначения

Насос (компрессор) мембранный

РКадет, РКадмирал или иных моделей аналогичного назначения

Устройство для твердофазной экстракции

"Доркус", "Вакэлют" или иных моделей аналогичного назначения

Аппарат универсальный для встряхивания

ТУ 64-1-2451-78

Шкаф (стол) лабораторный с вытяжным устройством



Набор реагентов для количественного определения тетрациклина типа "Ридаскрин Тетрациклин"

По спецификации изготовителя

Дигидрофосфат натрия водный

хч**

Гидрофосфат натрия

хч

Гидрофосфат натрия двухводный

хч

Хлорид натрия

хч

Гидрооксид натрия

хч

Моногидрат лимонной кислоты

хч

Щавелевая кислота

хч

ЭДТА-натриевая соль

хч

Твин 20

По спецификации изготовителя

Метанол* или этанол 95,0%

хч

Этилацетат

хч

н-гексан

хч

Ацетонитрил

хч

Дистиллированная вода

метанол* - ядовитое вещество, требует мер безопасности при работе;


хч** - химически чистые вещества

________________

     *** На территории Российской Федерации действует ГОСТ 24104-2001;
     **** Действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91, здесь и далее. - Примечание изготовителя базы данных.



5. Характеристика наборов для иммуноферментного определения тетрациклина


Для иммуноферментного определения тетрациклина могут быть использованы промышленно изготовленные наборы, метрологические характеристики которых не ниже указанных в настоящем документе после процедуры стандартизации их относительно данного метода.

5.1. Состав набора "Ридаскрин Тетрациклин"

Микротитровальный планшет на 96 лунок (12 стрипов по 8 лунок), сенсибилизированных препаратом тетрациклина - 1 шт.

Комплект стандартных растворов тетрациклина со следующими концентрациями: 0 нг/см, 0,5 нг/см, 1,5 нг/см, 4,5 нг/см, 13,5 нг/см, 40,5 нг/см в буферном растворе по 1,3 мл - 6 флаконов

Раствор антител - 6,0 см

Конъюгат вторичных антител с пероксидазой - 10,0 см

Субстрат, содержащий пероксид карбамида (мочевины) - 7,0 см

Хромоген, содержащий тетраметилбензидин - 7,0 см

Стоп-реагент, содержащий 1 N серную кислоту - 14,0 см

Буфер 1, для разбавления стандартных растворов тетрациклина и растворов образцов - 50,0 см

Буфер 2, для разбавления стандартных образцов при анализе молока - 10,0 см



Примечание. Набор рассчитан на проведение анализа в 2 повторностях: 42 исследуемых образца и 6 калибровочных проб (всего 96 определений на один планшет).

5.2. Аналитические характеристики набора

     

5.2.1. Специфичность метода


Метод анализа при использовании набора "Ридаскрин Тетрациклин" характеризуется показателем специфичности*, составляющим для:

Тетрациклина - 100%

Хлортетрациклина - 100%

Доступ к полной версии документа ограничен
Этот документ доступен в системах «Техэксперт» и «Кодекс».