Недействующий
Решение для управления процессами
производственной безопасности


ГОСТ Р 52426-2005

Группа Н09

     

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Вода питьевая

ОБНАРУЖЕНИЕ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ УЧЕТ ESCHERICHIA COLI И КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ

Часть 1

Метод мембранной фильтрации

Drinking water. Detection and enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria. Part 1. Membrane filtration method



ОКС 13.060.20

ОКП 01 3100

Дата введения 2007-01-01

     

Предисловие


Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004* "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

________________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 1.0-2012. - Примечание изготовителя базы данных.          

    Сведения о стандарте

1. РАЗРАБОТАН Рабочей группой специалистов Закрытого акционерного общества "РОСА", Муниципального государственного унитарного предприятия "Мосводоканал", Государственного учреждения "Научно-исследовательский институт экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н.Сысина" Российской академии медицинских наук, Открытого акционерного общества "Научно-исследовательский институт коммунального водоснабжения и очистки воды", Федерального государственного учреждения науки "Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии", Федерального научного центра гигиены им. Ф.Ф.Эрисмана, Федерального государственного учреждения здравоохранения "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора, Общества с ограниченной ответственностью "Протектор" на основе собственного аутентичного перевода стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 343 "Качество воды"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 декабря 2005 г. N 378-ст

4 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 9308-1:2000* "Качество воды. Обнаружение и количественный учет Escherichia coli и колиформных бактерий. Часть 1. Метод мембранной фильтрации" (ISO 9308-1:2000 "Water quality - Detection and enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria - Part 1: Membrane filtration method"). При этом дополнительные положения, фразы и слова, включенные в текст стандарта для учета потребностей национальной экономики Российской Федерации и особенностей российской национальной стандартизации, выделены в тексте стандарта курсивом**. Ссылка на международный стандарт ИСО 8199-1988 "Качество воды. Общее руководство по количественному учету микроорганизмов при культивировании" ввиду отсутствия соответствующего национального стандарта заменена ссылкой на МУК 4.2.1018-2001 "Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды. Методические указания".

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей.

** В оригинале обозначения и номера стандартов и нормативных документов в разделе "Предисловие" приводятся обычным шрифтом, остальные по тексту документа выделены курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.


Положения, выделенные в тексте стандарта вертикальной линией, расположенной слева от текста, заменяют ссылку на международный стандарт ИСО 8199-1988

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

6 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июнь 2007 г.


Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения


Настоящий стандарт устанавливает метод обнаружения и количественного учета Escherichia coli (далее - E.coli) и колиформных бактерий в воде, предназначенной для потребления человеком (далее - питьевой воде), в стандартных условиях испытаний (далее - стандартный тест) и при ускоренных испытаниях (далее - ускоренный тест).

Стандартный тест основан на мембранной фильтрации пробы питьевой воды с последующим культивированием отфильтрованных микроорганизмов на дифференцирующей агаризованной среде и вычислении количества E.coli и колиформных бактерий в пробе. В стандартном тесте используют среду с низкой селективностью для обнаружения поврежденных при подготовке питьевой воды бактерий. Вследствие низкой селективности среды фоновый рост микроорганизмов может отрицательно влиять на достоверность количественного учета микроорганизмов, например в водах неглубоких колодцев, не прошедших обеззараживания. Поэтому стандартный тест предназначен для испытаний воды, прошедшей обеззараживание, или воды с низкой численностью бактерий, качество которой соответствует первому классу подземных источников по ГОСТ 2761.

Ускоренный тест предназначен для обнаружения в питьевой воде E.coli в течение 24 ч при необходимости быстрого получения результатов испытаний. Ускоренный тест также основан на мембранной фильтрации пробы питьевой воды с последующим культивированием отфильтрованных микроорганизмов на селективных средах и вычислении количества E.coli в пробе.

Настоящий стандарт может быть использован и для других типов воды при условии, что взвешенные вещества и фоновая микрофлора не оказывают отрицательного влияния на фильтрацию, культивирование и учет микроорганизмов.

     2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

     ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
     
     
ГОСТ 2761-84 Источники централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения. Гигиенические, технические требования и правила выбора
     
     
ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия
     
     
ГОСТ 4233-77 Натрий хлористый. Технические условия
     
     
ГОСТ 5208-81 Спирт бутиловый нормальный технический. Технические условия
     
     
ГОСТ 5830-79 Спирт изоамиловый. Технические условия
     
     
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
     
     
ГОСТ 13805-76 Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей. Технические условия
     
     
ГОСТ 17206-96 Агар микробиологический. Технические условия
     
     
ГОСТ 17626-81 Казеин технический. Технические условия
     
     
ГОСТ 23932-90 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия
     
     
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
     
     
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
     
     
ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025-2000 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий
          
     
ГОСТ Р 51426-99 (ИСО 6887-83) Микробиология. Корма, комбикорма, комбинированное сырье. Общее руководство по приготовлению разведений для микробиологических исследований
     
     
ГОСТ Р 51592-2000 Вода. Общие требования к отбору проб
     
     
ГОСТ Р 51593-2000 Вода питьевая. Отбор проб
     
     
ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия
     
     Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте национального органа Российской Федерации по стандартизации в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный документ заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться замененным (измененным) документом. Если ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.


     3 Термины и определения


В настоящем стандарте применены термины с соответствующими определениями, включающие признаки и характеристики бактерий:

3.1 лактозоположительные бактерии (lactose-positive bacteria): Бактерии, способные к образованию колоний в аэробных условиях при (36±2) °С на селективной дифференцирующей лактозной культуральной среде с образованием кислоты в течение (21±3) ч при испытании по стандартному тесту.

3.2 колиформные бактерии (coliform bacteria): Лактозоположительные бактерии, являющиеся оксидазоотрицательными при испытаниях по стандартному тесту.

3.3 Escherichia coli (E.coli): Колиформные бактерии, которые продуцируют также индол из триптофана при (44,0±0,5) °С в течение (21±3) ч при испытаниях по стандартному тесту.

3.4 Escherichia coli (E.coli): Устойчивые к желчи бактерии, которые продуцируют также индол из триптофана при (44,0±0,5) °С в течение (21±3) ч при испытаниях по ускоренному тесту.

Примечание - Дополнительная характеристика колиформных бактерий и E.coli приведена в приложении А.

     4 Сущность метода

4.1 Основные положения

Сущность метода заключается в фильтровании проб питьевой воды заданного объема через мембранные фильтры, инкубации отфильтрованных микроорганизмов на заданных средах в заданных условиях, идентификации выросших колоний, их количественной оценке и подтверждении этой оценки с помощью стандартного и (или) ускоренного тестов.

Стандартный тест предусматривает инкубацию мембраны на селективной среде с последующим биохимическим подтверждением типичных лактозоположительных колоний, позволяющим обнаружить и провести количественный учет колиформных бактерий и E.coli в течение 2-3 сут.

Ускоренный тест состоит из двух этапов инкубации, позволяющих обнаружить и провести количественный учет E.coli в течение (21±3) ч.

4.2 Фильтрация и инкубация

Исследуемые объемы пробы питьевой воды фильтруют через мембраны, удерживающие микроорганизмы.

При испытаниях по стандартному тесту мембрану помещают на селективную лактозную агаризованную культуральную среду и проводят инкубацию отфильтрованных микроорганизмов при (36±2) °С в течение (21±3) ч; при испытаниях по ускоренному тесту мембрану помещают на агаризованную среду, содержащую казеин трипсиновой ферментации, и проводят инкубацию при (36±2) °С в течение 4-5 ч с последующей инкубацией при (44,0±0,5) °С в течение 19-20 ч на агаризованной среде, содержащей казеин трипсиновой ферментации и соли желчи.

4.3 Оценка и подтверждение (стандартный тест)

Характерные колонии (8.3.2) на мембране учитывают как колонии лактозоположительных бактерий. Для подтверждения наличия колиформных бактерий и E.coli выполняют пересев случайно выбранных характерных колоний и проводят испытания, подтверждающие отсутствие их оксидазной активности и образование индола. Вычисляют количество колиформных бактерий и E.coli в 100 мл пробы питьевой воды.

4.4 Оценка и подтверждение (ускоренный тест)

Колонии на мембране, обладающие свойством образовывать индол из внесенного в агаризованную среду L-триптофана, учитывают как колонии E.coli. Вычисляют количество E.coli в 100 мл пробы питьевой воды.

     5 Оборудование, материалы

Для проведения испытаний применяют обычное микробиологическое оборудование, в частности, указанное ниже:

5.1 Стерилизатор паровой.

5.2 Водяная баня или термостат, обеспечивающие поддержание температуры (36±2) °С.

5.3 Водяная баня или термостат, обеспечивающие поддержание температуры (44,0±0,5) °С.

Примечание - Для ускоренного теста вместо термостатов, указанных в 5.2 и 5.3, допускается использовать программируемый термостат, обеспечивающий смену режимов инкубации и поддержание температуры (36±2) °С и (44,0±0,5) °С.

5.4 рН-метр, обеспечивающий измерение водородного показателя рН с допускаемой погрешностью ±0,1.

5.5 Оборудование для мембранной фильтрации согласно 1].

5.6 Фильтры мембранные, изготовленные из эфирцеллюлозных материалов, диаметром, как правило, от 47 до 50 мм, с номинальным диаметром пор 0,45 мкм, и, предпочтительно, с нанесенной сеткой (для концентрирования микроорганизмов). Допускается использовать фильтры согласно [1].

Примечание - Мембранные фильтры не должны обладать свойствами, ингибирующими или стимулирующими рост микроорганизмов. Чернила, используемые для нанесения сетки, не должны оказывать влияние на рост бактерий. Если мембранные фильтры поставляют нестерильными, их следует простерилизовать в соответствии с инструкциями изготовителя. Качество каждой партии мембран следует проконтролировать в соответствии [2], поскольку использование различных торговых марок фильтров может привести к различиям в формировании колоний и их окраски.


При ускоренном тесте для лучшего выявления образования окраски используют мембранные фильтры зеленого цвета.

5.7 Фильтры мембранные с номинальным диаметром пор 0,2 мкм (для стерилизации растворов).

5.8 Пинцет плоскоконечный для работы с мембранными фильтрами.

5.9 Лампа ультрафиолетовая с длиной волны 254 нм.

Примечание - При работе с ультрафиолетовой лампой используют защитные очки и перчатки, так как ультрафиолетовое излучение вызывает раздражение глаз и кожи.

5.10 Подложки под фильтры диаметром не менее диаметра используемого фильтра.

5.11 Пипетки вместимостью 1,0, 5,0, 10,0 мл с ценой деления 0,1 мл (многоразового или одноразового использования) по ГОСТ 29227.

5.12 Пробирки (многоразового или одноразового использования) по ГОСТ 25336.

5.13 Посуда мерная лабораторная стеклянная 2-го класса точности по ГОСТ 1770: цилиндры вместимостью 100, 250, 500 мл; пробирки мерные вместимостью 10, 15, 20 мл.