МУК 4.2.801-99

Методические указания

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методы микробиологического контроля парфюмерно-косметической продукции

Дата введения - с момента утверждения

1. Разработаны: Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава России (Подунова Л.Г., Кривопалова Н.С., Стреляева Н.Е.), Научно-производственным центром "Гидробиос" Федерального управления медико-биологических и экстремальных проблем при Минздраве России (Герасимова Г.А., Синилов С.К., Бутова Л.Г., Критская И.В.), Научно-исследовательским институтом медицины труда РАМН (Просветова Н.К., Александрова Л.З., Иванова Л.А., Фролова Я.А.).

2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации 27 декабря 1999 г.

3. Введены впервые.

1. Общие положения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для обеспечения контроля качества парфюмерно-косметических изделий по микробиологическим показателям, введенным СанПиН 1.2.631-97* "Гигиенические требования к производству и безопасности парфюмерно-косметической продукции", и устанавливают методы лабораторных испытаний качества парфюмерно-косметической продукции по микробиологическим показателям безопасности для здоровья человека, проводимых в порядке производственного контроля, государственного санитарно-эпидемиологического надзора и при испытании указанной продукции в целях сертификации соответствия.

__________________
     * Вероятно ошибка оригинала. Следует читать СанПиН 1.2.681-97, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.

1.2. Методические указания предназначены для использования в аккредитованных бактериологических производственных, испытательных лабораториях и лабораториях организаций государственной санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации и позволяют проводить контроль на соответствие СанПиН 1.2.631-97 "Гигиенические требования к производству и безопасности парфюмерно-косметической продукции".

1.3. Данный документ разработан в связи с необходимостью унификации и усовершенствования методов микробиологического анализа парфюмерно-косметической продукции.

Методы адаптированы к условиям работы лабораторий, осуществляющих контроль качества и безопасности парфюмерно-косметической продукции.

1.4. Настоящие методические указания должны учитываться при пересмотре действующей и разработке вновь создаваемой нормативной документации на парфюмерно-косметическую продукцию.

2. Нормативные ссылки

2.1. Закон Российской Федерации "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" от 30.03.99 N 52-ФЗ.

2.2. Положение о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании, утвержденное Постановлением Правительства Российской Федерации от 15.06.94 N 625*.

_______________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует "Положение о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании", утвержденное постановлением Правительства РФ от 24 июля 2000 года N 554. - Примечание изготовителя базы данных.     

2.3. Положение о государственной санитарно-эпидемиологической службе РФ, утвержденное Постановлением Правительства Российской Федерации от 30.06.98 N 680*.

________________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует Положение о федеральном государственном санитарно-эпидемиологическом надзоре, утвержденное постановлением Правительства РФ от 5 июня 2013 года N 476. - Примечание изготовителя базы данных.

3. Методы отбора и подготовки проб для микробиологического анализа

3.1. Отбор проб

3.1.1. При отборе проб следует руководствоваться требованиями ГОСТ 29188.0-91 "Парфюмерно-косметические изделия. Правила приемки, отбор проб, методы органолептических испытаний" и ГОСТ 26668-85* "Продукты пищевые. Методы отбора проб для микробиологических анализов".

________________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 54004-2010, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.

3.1.2. Пробы парфюмерно-косметических изделий для микробиологического анализа отбирают до отбора проб для физико-химических, органолептических и других видов испытаний с соблюдением правил асептики, для того чтобы исключить вторичное микробное загрязнение продукта.

3.1.3. От каждой партии парфюмерно-косметических изделий, подлежащих контролю, следует брать не менее трех единиц изделий в потребительской таре (упаковке), которая не должна иметь следов повреждений.

3.1.4. При испытаниях на стерильность от каждой партии парфюмерно-косметических изделий, независимо от ее объема, отбирают 10 ампул или 10 других единиц упаковки.

3.1.5. Пробу, отобранную от отдельной единицы упаковки, называют разовой. Количество продукта в разовых пробах из каждой единичной упаковки должно быть одинаковым. Разовые пробы соединяют, перемешивают и составляют среднюю пробу.

3.2. Подготовка проб к анализу

3.2.1. Подготовка проб для определения микробиологической чистоты

3.2.1.1. Перед вскрытием упаковки место соединения крышки с тарой обрабатывают 70%-ным раствором этилового спирта. Первую порцию в количестве примерно 10% содержимого упаковки отбрасывают, затем отбирают пробы и переносят в стерильную колбу или флакон вместимостью 100-200 см.

3.2.1.2. Для испытания готовят среднюю пробу не менее 15 г (см) из упаковок, отобранных по п.3.1.3, и состоящую из равных разовых проб. Такое же количество упаковок используют и для повторных испытаний. В случае, если масса (объем) парфюмерно-косметического средства в единичной упаковке менее 5 г (см), содержимое исследуют полностью или используют большее количество упаковок.

3.2.1.3. (5,0±0,1) г (см) или (10,0±0,1) г (см) средней пробы отбирают стерильно и помещают в стеклянные колбы или флаконы, содержащие соответственно (45±1) см или (90±1) см 1%-ного раствора твина-80 в физиологическом растворе (п.6.4.2). Смесь тщательно перемешивают в течение 15-30 мин до полной гомогенизации (либо помещают на аппарат для встряхивания). При необходимости пробы прогревают на водяной бане или в термостате до 40-45 °С, но не более 10 мин. Для гомогенизации продукции, плохо растворимой в воде, используют стеклянные бусы.

Эмульсии типа вода-масло подготавливают аналогичным способом, используя 4%-ный раствор твина-80 в физиологическом растворе (п.6.4.2) и предварительно (до встряхивания) прогревая на водяной бане или в термостате до 40-45 °С в течение 20 мин.

Получают смесь, в 10 г (см) которой содержится 1 г (см) парфюмерно-косметического средства - первое разведение 1:10 (10). При необходимости делают последующие десятикратные 1:100 (10) и 1:1000 (10) разведения.

3.2.1.4. Полученные разведения используют для посевов. Время с момента окончания подготовки пробы до начала высева не должно превышать 30 мин.

3.2.1.5. Определение собственной антимикробной активности парфюмерно-косметической продукции.

Метод основан на подавлении роста тест-штаммов микроорганизмов под действием испытуемого парфюмерно-косметического средства. В качестве тест-штаммов используют Bacillus subtilis АТСС 6633 (или Bacillus cereus АТСС 10702), Escherichia coli АТСС 25922, Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027 (или Pseudomonas aeruginosa ГИСК 453), Staphylococcus aureus АТСС 6538-Р и культуру Candida albicans АТСС 885-653.

Определение собственной антимикробной активности проводится для парфюмерно-косметических средств, в состав которых входят консерванты и другие вещества, обладающие антимикробным действием.

Собственная антимикробная активность определяется однократно для каждой конкретной рецептуры парфюмерно-косметического средства.

Культуры Bacillus subtilis (Bacillus cereus), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus выращивают на одной из жидких сред по п.6.4.11.1 или п.6.4.11.2 при температуре (37±1) °С в течение (19±1) ч. Культуру Candida albicans выращивают на жидкой среде Сабуро по п.6.4.8.1 при температуре (30±1) °С в течение (48±3) ч.

Из каждой выросшей культуры готовят взвесь микроорганизмов, добавляя физиологический раствор по п.6.4.1 в соотношении 1:1000.

В пробирки вносят по 1 см первого разведения испытуемой пробы парфюмерно-косметического средства по п.3.2.1.3 и добавляют:

- в пробирку N 1 - 10 см буферного раствора по п.6.4.16 и 1 см взвеси Bacillus subtilis (Bacillus cereus);

- в пробирку N 2 - 10 см буферного раствора по п.6.4.16 и 1 см взвеси Candida albicans;

- в пробирку N 3 - 10 см одной из питательных сред по п.6.4.9 и 1 см взвеси Escherichia coli;

- в пробирку N 4 - 10 см одной из питательных сред по п.6.4.11 и 1 см взвеси Pseudomonas aeruginosa;

- в пробирку N 5 - 10 см одной из питательных сред по п.6.4.13 и 1 см взвеси Staphylococcus aureus.

Контролем служат пробирки с питательными средами и соответствующими тест-штаммами, в которые вместо испытуемого парфюмерно-косметического средства вносят то же количество стерильной дистиллированной воды.

Посевы инкубируют при (30±1) °С в течение (48±3) ч.

В случае отсутствия роста тест-штаммов микроорганизмов на соответствующих питательных средах отмечают антимикробное действие испытуемого средства.

Для устранения антимикробного действия входящих в состав парфюмерно-косметических средств консервантов или веществ, обладающих антимикробным действием, среднюю пробу в количестве (5,0±0,1) г (см) или (10,0±0,1) г (см) отбирают стерильно и помещают в стеклянные колбы или флаконы, содержащие соответственно (45±1) см или (90±1) см 4%-ного раствора твина-80 в физиологическом растворе, или увеличивают разведение испытуемой пробы.

Дальнейшие испытания проводят в соответствии с п.4.

3.2.2. Подготовка проб к анализу на стерильность

Испытание парфюмерно-косметических средств на стерильность проводят методом прямого посева или методом мембранных фильтров.

Метод мембранных фильтров не применим для суспензий или гомогенатов парфюмерно-косметических средств, загрязняющих при фильтрации поры фильтров.

3.2.2.1. Перед вскрытием ампулы с парфюмерно-косметической продукцией обрабатываются этиловым спиртом. Шейка ампулы осторожно прогревается в пламени горелки. На хорошо прогретую шейку ампулы капают 1 каплю стерильного физиологического раствора (п.6.4.1). Ампулы осторожно вскрывают по месту образовавшейся в стекле трещины.

3.2.2.2. Содержимое 10 ампул или 10 других упаковок объединяют в единую пробу. Из объединенной пробы отбирают стерильно (5,0±0,1) г (см) или (10,0±0,1) г (см) парфюмерно-косметического средства.

При испытаниях методом прямого посева отобранные пробы непосредственно засевают в соответствующие питательные среды.

При испытаниях методом мембранных фильтров отобранные пробы помещают в стеклянные колбы или флаконы, содержащие соответственно (45±1) см или (90±1) см стерильного 1%-ного раствора твина-80 в физиологическом растворе, предварительно пропущенного через мембранный фильтр с размером пор (0,45±0,02) мкм. Пробы тщательно перемешивают в течение 15-20 мин до полной гомогенизации.

При испытании масляных растворов пробы подготавливают аналогичным способом, используя 4%-ный раствор твина-80 в физиологическом растворе и предварительно (до встряхивания) прогревая на водяной бане или в термостате до 40-45 °С в течение 20 мин.

4. Методы анализа

При микробиологическом контроле парфюмерно-косметической продукции используют стандартизованные методы микробиологического посева. Определяют следующие группы микроорганизмов: мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы; дрожжи, дрожжеподобные и плесневые грибы; бактерии семейства Enterobacteriaceae; бактерии вида Staphylococcus aureus; бактерии вида Pseudomonas aeruginosa.

В микробиологических лабораториях, осуществляющих контроль качества и безопасности парфюмерно-косметической продукции, допускается применение импедансного метода в соответствии с Методическими указаниями МУК 4.2.590-96* "Бактериологические исследования с использованием экспресс-анализатора "Бак Трак 4100", утвержденными 18.11.96 Государственным комитетом санитарно-эпидемиологического надзора. Использование прибора "Бак Трак 4100" позволяет сократить время испытаний и получить результат через 6-8 ч после начала исследований. Прибор аттестован и внесен в Государственный реестр (N 14313-94).

________________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует МУК 4.2.2578-10, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.

4.1. Определение общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных бактерий

4.1.1. Сущность метода

Метод основан на выявлении и количественном подсчете всех выросших колоний микроорганизмов при культивировании посевов в аэробных условиях при температуре (30±1) °С в течение (72±3) ч в пересчете их количества на 1 г (см) исследуемого продукта.

4.1.2. Проведение анализа

Для определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных бактерий выбирают те разведения, при посеве которых на чашках вырастает не менее 15 и не более 300 колоний.