ГОСТ Р 51441-99 Соки фруктовые и овощные. Ферментативный метод определения содержания уксусной кислоты (ацетата) с помощью спектрофотометрии

     8 Проведение испытаний

8.1 Общие положения

Испытания проводят для пробы определенного объема и результаты выражают в виде массовой концентрации уксусной кислоты. Для навески пробы, зная коэффициент разбавления пробы, результаты выражают в виде массовой доли уксусной кислоты в процентах. Для продуктов с высокой вязкостью и(или) высоким содержанием частиц мякоти (например, для пульпы) испытания проводят в навеске пробы.

Испытание проводят при постоянной температуре в интервале от 20 °С до 25 °С.

При использовании спектрофотометра измерения проводят только при длине волны, соответствующей абсорбционному максимуму НАД - 340 нм. При использовании фотоэлектрического колориметра измерения проводят со светофильтром длиной волны, соответствующей максимуму пропускания 340 или 365 нм.

Растворы берут градуированными пипетками. Добавление растворов пробы, ферментов, коферментов и буферных растворов осуществляют соответствующими пипеточными дозаторами.

Выполняют два параллельных определения.

В каждую серию испытаний включают стандартный раствор уксусной кислоты.

Схема проведения испытаний приведена в приложении А.

8.2 Взятие пробы для анализа

Для испытаний берут такой объем пробы сока, чтобы содержание уксусной кислоты в кювете было между 1 и 30 мкг (примерно 0,10 см пробы). Если концентрация уксусной кислоты меньше 10 мг/дм, то объем пробы увеличивают до 1,5 см. Используют пробу непосредственно после разбавления, даже если она слегка окрашена.

8.3 Проведение испытания раствора пробы

В кювету спектрофотометра (фотоэлектроколориметра) вносят 1,00 см буферного раствора, 0,10 см раствора НАД/КоА, 0,10 см раствора АТФ, 0,10 см раствора пробы и 1,90 см воды. Если вносимый в кювету объем раствора пробы превышает 0,10 см (см. 8.2), вносимый объем воды уменьшают так, чтобы суммарный объем пробы и воды составлял 2,0 см. Смесь перемешивают, выдерживают в течение 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора относительно воздуха (приложение А).

К содержимому кюветы добавляют 0,02 см раствора МДГ/ЦС, перемешивают, выдерживают в течение 2 мин и измеряют оптическую плотность раствора (приложение А).

В ту же кювету добавляют 0,01 см суспензии АКС, перемешивают и после завершения реакции (через 10-15 мин) измеряют оптическую плотность раствора относительно воздуха (приложение А).

Завершение реакции проверяют измерением оптической плотности каждые 2 мин в течение 10 мин, чтобы установить момент начала увеличения значения оптической плотности на постоянную величину. При необходимости проводят экстраполяцию оптической плотности раствора в точке прибавления последнего фермента. В этом случае при подсчетах используют экстраполированную разность оптических плотностей (приложение Б).

8.4 Проведение контрольного испытания

В кювету вносят 1,00 см буферного раствора, 0,10 см раствора НАД/КоА, 0,10 см раствора АТФ и 2,00 см воды, перемешивают, выдерживают в течение 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора относительно воздуха. В кювету добавляют 0,02 см раствора МДГ/ЦС, перемешивают, выдерживают в течение 2 мин и измеряют оптическую плотность раствора относительно воздуха.

В кювету с раствором добавляют 0,01 см суспензии АКС, перемешивают, выдерживают в течение 10-15 мин и измеряют оптическую плотность относительно воздуха.