ГОСТ Р 51441-99

Группа Н59

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ

Ферментативный метод определения содержания уксусной кислоты (ацетата) с помощью спектрофотометрии

Fruit and vegetable juices. Enzymatic method for spectrophotometric determination of acetic acid (acetate) content

ОКС 67.160.20

ОКСТУ 9109

Дата введения 2001-01-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП)

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки плодов и овощей"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 596-ст

3 Стандарт гармонизирован с европейским стандартом ЕН 12632:1999* "Соки фруктовые и овощные. Ферментативное определение содержания уксусной кислоты (ацетата). НАД - спектрометрический метод"

_______________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июль 2010 г.

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые, овощные соки и подобные им продукты и устанавливает ферментативный метод определения общего содержания уксусной кислоты или солей уксусной кислоты (ацетатов) в расчете на уксусную кислоту в диапазоне определения массовой концентрации от 0,15 до 0,5 г/дм или массовой доли от 0,015% до 0,05%.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 199-78 Реактивы. Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3769-78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4201-79 Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия

ГОСТ 4209-77 Реактивы. Магний хлористый 6-водный. Технические условия

ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

_______________

* С 1 июля 2002 г. действует ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.

ГОСТ 24363-80 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб

ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ Р 51431-99 Соки фруктовые и овощные. Метод определения относительной плотности

ГОСТ Р 52501-2005 (ИСО 3696:1987) Вода для лабораторного анализа. Технические условия

     3 Обозначения и сокращения

3.1 Обозначения

В настоящем стандарте применяют следующие обозначения:

- молярная концентрация вещества;

- ускорение силы тяжести.

3.2 Сокращения

В настоящем стандарте применяют следующие сокращения:

АКС - Ацетил-коэнзим А-синтетаза;

КоА - Коэнзим А;

АТФ - Аденозин-5'-трифосфат;

АМФ - Аденозин-монофосфат;

ЦС - Цитрат-синтаза;

НАД - -Никотинамидадениндинуклеотид;

НАДН - -Никотинамидадениндинуклеотид, восстановленная форма;

МДГ - Малатдегидрогеназа;

ME - 1-я международная единица ферментативной активности, равная количеству фермента, необходимого для катализа превращения 1 микромоля вещества за 1 мин при температуре 25 °С в стандартных условиях.

     4 Сущность метода

Уксусная кислота (ацетат) в присутствии фермента ацетил-коэнзима А-синтетазы (АКС) с аденозин-5'-трифосфатом (АТФ) и коэнзимом А (КоА) превращается в ацетил-КоА:     

.

Ацетил-КоА реагирует с оксалоацетатом с образованием цитрата в присутствии цитрат-синтазы (ЦС):

.

Оксалоацетат, необходимый для реакции (2), образуется из малата и никотинамидадениндинуклеотида (НАД) в присутствии малатдегидрогеназы (МДГ). В этой реакции НАД восстанавливается до НАДН.

  .

В основе метода лежит образование НАДН, количество которого определяют по увеличению оптической плотности при длине волны 334 нм, 340 нм или 365 нм. Количество образовавшегося НАДН зависит от концентрации уксусной кислоты, однако зависимость нелинейная.

     5 Средства измерений, лабораторное оборудование, реактивы и материалы

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 20 г, 2-го класса точности.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 500 г, 3-го класса точности.

Спектрофотометр, позволяющий проводить исследования при длине волны 340 нм, с допустимой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1% или колориметр фотоэлектрический лабораторный с устройством для считывания значений оптической плотности со светофильтром длиной волны, соответствующей максимуму пропускания (340±10) нм или (365±10) нм, и допустимой абсолютной погрешностью измерения не более 1%.

Кюветы из кварца, оптического стекла или полистирола рабочей длиной 10 мм.

Иономер или рН-метр с погрешностью измерения не более 0,05 рН.

Пипетки по ГОСТ 29227 типа 3, исполнения 1, 1-го класса точности, вместимостью 1 и 10 см.

Дозаторы пипеточные вместимостью 1, 0,2 и 0,02 см, с относительной погрешностью дозирования ±1% [1]*.

_______________

* См. раздел Библиография. - Примечание изготовителя базы данных.

Колба мерная по ГОСТ 1770 исполнения 2 вместимостью 100 см.

Центрифуга лабораторная, обеспечивающая центрифужное ускорение 3000 на дне центрифужной пробирки.

Примечание - Частоту вращения ротора , мин, требуемую для получения соответствующего ускорения центрифуги, вычисляют по формуле

,                                                    (1)